1、目的：通過原代培養(yǎng)SD新生鼠海馬神經(jīng)元細胞，觀察高糖環(huán)境下神經(jīng)元細胞形態(tài)、超微結構及應用Western blot檢測MLCK及F-actin的表達改變，探討高糖對神經(jīng)元細胞MLCK表達及神經(jīng)元細胞骨架的影響。
　　方法：1.海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)及純度鑒定：在適宜條件下培養(yǎng)SD新生鼠海馬神經(jīng)元細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)并用NSE免疫組化鑒定其純度；2.高糖對海馬神經(jīng)元細胞形態(tài)及超微結構的影響：根據(jù)培養(yǎng)基中糖濃度不同，設立對照組和

2、高糖組，其中含25mmol/L葡萄糖為常規(guī)培養(yǎng)神經(jīng)元細胞的對照組，45mmol/L葡萄糖為高糖組，應用倒置顯微鏡、電子顯微鏡觀察各組海馬神經(jīng)元細胞形態(tài)及超微結構；3.高糖對MLCK表達改變及其對細胞骨架影響：使用Western blot技術檢測各組細胞內(nèi)MLCK、F-actin表達，同時分析MLCK表達與F-actin表達的相關性，探討高糖環(huán)境對MLCK及神經(jīng)元細胞微絲骨架的影響。
　　結果：1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細胞，倒置顯微鏡

3、下觀察培養(yǎng)7d的神經(jīng)元形態(tài)成熟，體積較大，聚集存活，光暈明顯；突起發(fā)達并向外延伸，互相連接形成密集交錯的網(wǎng)絡。經(jīng)鑒定細胞純度達90％以上；2.與對照組相比，高糖組海馬神經(jīng)元細胞突觸縮短，超微結構顯示細胞核形態(tài)不規(guī)則，細胞微絲骨架不完整；3.與對照組相比，高糖組細胞內(nèi)F-actin表達降低（P＜0.05），MLCK表達增高（P＜0.05），且MLCK的表達與F-actin表達呈負相關關系（P＜0.05，r=-0.838）。
　　結論