1、過(guò)氧化物酶(Peroxidase，POD，EC1.11.1.7)是一類在生物體內(nèi)普遍存在的、由單一肽鏈和鐵卟啉組成的血紅蛋白類氧化酶，催化由H2O2參與的氧化反應(yīng)，例如參與胺類和酚類化合物的氧化反應(yīng)。POD在生物體內(nèi)發(fā)揮多種重要功能，例如參與分解吲哚乙酸、合成木質(zhì)素和植物體內(nèi)防御反應(yīng)。當(dāng)今，該酶不僅廣泛用于免疫印跡、酶聯(lián)反應(yīng)和電鏡技術(shù)等生物學(xué)研究，而且在污水處理、生物傳感器等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
　　以新鮮蕹菜為原料，經(jīng)過(guò)勻漿、靜置

2、抽提、硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200凝膠過(guò)濾層析等步驟，分離純化獲得電泳純的蕹菜POD。該酶的比活力為35972.96U/mg，回收率為12.21％，純化倍數(shù)達(dá)168.48。經(jīng)過(guò)SDS-PAGE以及Superdex-200凝膠過(guò)濾層析，測(cè)定該酶的相對(duì)分子質(zhì)量約為42.7KD。
　　用過(guò)氧化氫及愈創(chuàng)木酚作底物測(cè)定蕹菜過(guò)氧化物酶的酶活，發(fā)現(xiàn)該酶最適溫度為40℃，最適pH值6，并且在2

3、0～50℃及pH5～8的范圍內(nèi)具有良好的的穩(wěn)定性。以不同濃度的H2O2為底物，測(cè)得該酶的Km值為18.32mmol/L。NaCl、Urea、Zn2+、Mg2+對(duì)該酶都具有較強(qiáng)的激活作用，SDS，KSCN、AsA、Ba2+、Mn2+、Fe2+、甲醇、乙醇、正丁醇和異丙醇對(duì)蕹菜POD活力均有抑制作用，其中AsA對(duì)POD有極強(qiáng)的抑制作用，當(dāng)濃度為0.01mol/L時(shí)，酶活力接近為0。
　　選擇特定的化學(xué)修飾劑，分別用乙酰丙酮、二硫蘇糖醇

4、、氯汞苯甲酸、順丁烯二酸酐、氯胺-T、苯甲基磺酰氯、N-乙酰咪唑和溴乙酸選擇性地對(duì)其進(jìn)行化學(xué)修飾，并且測(cè)定修飾前后酶活力變化。結(jié)果表明:精氨酸殘基、賴氨酸殘基、組氨酸殘基和巰基是蕹菜過(guò)氧化物酶發(fā)揮活性的必需基團(tuán)，而甲硫氨酸硫醚基、絲氨酸殘基和酪氨酸酚羥基可能不是蕹菜過(guò)氧化物酶活性中心的必需基團(tuán)。
　　利用0.2％ PVA-CA作載體，飽和硼酸作交聯(lián)劑，CaCl2作固定劑固定蕹菜POD，通過(guò)單因素試驗(yàn)探究了各個(gè)因素對(duì)固定化的影響;再