shRNA沉默Nampt對(duì)SKOV3卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及機(jī)制探討.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:觀察RNA干擾沉默Nampt蛋白對(duì)體外培養(yǎng)的SKOV3人卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,并探討其作用機(jī)制。
　　方法:(1)Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達(dá)載體 shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細(xì)胞。(3)噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)shRNA-Nampt卵巢癌SKOV3細(xì)胞生存率的影響。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)Nampt低表達(dá)對(duì)SKOV3細(xì)胞

2、增殖的影響。(5)QRT-PCR和Western-blotting檢測(cè)低表達(dá)Nampt蛋白對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞NAD、SIRT1、P53蛋白分子表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)成功構(gòu)建Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒并鑒定。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達(dá)載體shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細(xì)胞后Nampt蛋白表達(dá)降低。(3)MTT結(jié)果顯示shRNA-Nampt組人卵

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