1、鹽酸克侖特羅(Clenbuterol，CLB)，俗稱瘦肉精，是一種β<,2>-腎上腺素受體激動劑。作為治療哮喘藥物已經(jīng)有30多年了。不幸的是這類藥物被非法用來作為家畜的生長促進劑，用以改善營養(yǎng)物質(zhì)在脂肪和肌肉之間的重新分配，增加瘦肉。這種非法應(yīng)用會對食用殘留有此類藥物畜產(chǎn)品的消費者產(chǎn)生毒害作用，給人民的身體健康和生命安全造成潛在的危害。因此，世界上許多國家都禁止在畜牧業(yè)上使用鹽酸克侖特羅。為了防止對人類的危害，必須建立快速、靈敏、有效的

2、檢測方法。ELISA方法檢測鹽酸克侖特羅殘留是一種快捷、可靠的方法，可在實際檢測中應(yīng)用。噬菌體肽庫展示技術(shù)近年來發(fā)展很快，可以用來淘選CLB替代抗原的模擬表位。這也為其它小分子半抗原物質(zhì)的ELISA方法的建立提供新的思路。 本論文主要包含兩部分內(nèi)容： 1 建立鹽酸克侖特羅間接競爭ELISA檢測方法。 2 用噬菌體肽庫展示技術(shù)淘選鹽酸克侖特羅替代抗原的模擬表位。 第一部分包括鹽酸克侖特羅偶聯(lián)抗原的合成，

3、單克隆抗體的純化和效價的測定，ELISA各個影響因素最佳條件的優(yōu)化，該ELISA方法性能的評價等。根據(jù)實驗建立了鹽酸克侖特羅間接競爭ELISA檢測方法，包被偶聯(lián)抗原為0.5ng/mL，加入CLB單抗原液稀釋為1:250000，酶標(biāo)二抗原液稀釋為1:5000。其間接競爭標(biāo)準(zhǔn)曲線其線性范圍為0.38-50ng/mL，IC<,50>為6.25ng/mL，檢測下限為0.19ng/mL。曲線方程為y=35.149x+19.145，R=0.9937

4、8。批內(nèi)和批間的變異系數(shù)分別為8.3％和9.97％。進行樣品加標(biāo)回收實驗，平均回收率為93.14％。 第二部分包括以抗CLB的單克隆抗體為靶分子，從噬菌體隨機7肽庫中進行4輪親和淘選。從第4輪噬菌平板上隨機挑選18個噬菌斑，經(jīng)間接ELISA和間接競爭ELISA鑒定，挑選出6個合適的噬菌體。經(jīng)測序可知其序全列為N-His-His-Thr-Phe-Phe-Lys-His-C。用噬菌體P8替代CLB抗原建立了間接競爭ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線