1、Periaxin是施旺細(xì)胞中特異表達(dá)的蛋白質(zhì)。在外周神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中,Periaxin蛋白在髓鞘的成熟與維護(hù)中發(fā)揮重要作用。Periaxin的基因缺失或突變可以引起脫髓鞘型腓骨肌萎縮癥(CMT)4F亞型的發(fā)生。由于mRNA不同的剪切方式,Periaxin基因產(chǎn)生L-Periaxin和S-Periaxin兩種不同的蛋白剪接體。人類L-Periaxin蛋白含有1461個(gè)氨基酸,含有四個(gè)結(jié)構(gòu)域包括PDZ結(jié)構(gòu)域、NLS結(jié)構(gòu)域、重復(fù)結(jié)構(gòu)域及C端

2、酸性氨基酸結(jié)構(gòu)域。其中PDZ結(jié)構(gòu)域?yàn)橹匾牡鞍紫嗷プ饔媒Y(jié)構(gòu)域,可能參與Periaxin蛋白二聚體的形成,NLS為核定位信號(hào)區(qū),介導(dǎo)Periaxin蛋白的核輸入及與DRP2蛋白的相互作用,重復(fù)序列和酸性結(jié)構(gòu)域的功能未見相關(guān)報(bào)道。
　　Ezrin作為一種細(xì)胞膜與細(xì)胞骨架的連接蛋白,屬ERM蛋白家族成員,主要負(fù)責(zé)將細(xì)胞外信號(hào)分子傳遞到骨架蛋白相連接的重要聯(lián)系分子,激活相應(yīng)的信號(hào)通路、調(diào)控細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)成、黏附、吞噬、運(yùn)動(dòng)、血管形成等,Ez

3、rin蛋白與腫瘤發(fā)生、發(fā)展,特別是腫瘤的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Ezrin蛋白全長有585個(gè)氨基酸,包含3個(gè)結(jié)構(gòu)域:分別是N端由296個(gè)氨基酸組成的FERM結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)伸向細(xì)胞膜能直接或間接與胞膜連接,直接連接是直接綁定到單跨膜結(jié)構(gòu)域目標(biāo)蛋白的胞質(zhì)尾上,包括結(jié)合CD44、CD43、CD95、ICAM-1、-2、-3及syndecan-2等,間接結(jié)合的蛋白包含多個(gè)跨膜域,如CFTR,Na/K逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,需要接頭蛋

4、白含有至少一個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域,PDZ結(jié)構(gòu)域可以介導(dǎo)膜上的蛋白聚集;緊接其后的中間部分為延伸的α螺旋結(jié)構(gòu)域,其功能尚未明確;另一端有34個(gè)氨基酸組成的帶正電的羧基端(C端)F型肌動(dòng)蛋白結(jié)合區(qū),該區(qū)伸向胞漿,在該區(qū)內(nèi)有1個(gè)蘇氨酸殘基(Thr567),是Ezrin最重要的磷酸化活化位點(diǎn)。
　　小鼠六角形晶狀體纖維細(xì)胞的各連接點(diǎn)上Periaxin成簇聚集,與ankyrin-B、spectrin、NrCAM、filensin、ezrin和de

5、smoyokin等膜蛋白共同組成一個(gè)高分子復(fù)合物,該復(fù)合物的形成對(duì)于晶狀體纖維細(xì)胞的正確聚集、分布及形態(tài)的維持等方面均具有重要作用。
　　本文首先通過免疫共沉淀、GST-Pull-Down實(shí)驗(yàn)從不同角度驗(yàn)證了L-Periaxin(1-1461)與Ezrin(1-585)之間的相互作用。然后將L-Periaxin與Ezrin的全長及不同截短型分別克隆到帶有兩種不同顏色熒光蛋白(GFP或RFP)的載體中,共轉(zhuǎn)染到Hela細(xì)胞中過表達(dá)帶

6、有熒光的融合蛋白,用細(xì)胞內(nèi)熒光共定位檢測L-Periaxin與Ezrin兩者的相互作用。最后利用黃色熒光蛋白(YFP)的特性作為報(bào)告基因,將其分割成2個(gè)不具有熒光活性的分子片段,將這兩個(gè)互補(bǔ)片段分別與L-Periaxin與Ezrin的全長及不同截短型融合表達(dá),檢測L-Periaxin與Ezrin兩者的相互作用及具體作用的區(qū)域確定。結(jié)果表明,L-Periaxin蛋白與Ezrin蛋白之間存在相互作用,其可能的作用方式為L-Periaxin(