1、河豚魚肉質(zhì)細(xì)嫩,味道鮮美,營養(yǎng)豐富,享有“魚中之王”的美譽(yù),備受美食家的青睞。但是河豚魚內(nèi)臟、卵巢、血液、魚皮、魚頭等部位含有劇毒,如加工處理不當(dāng)或誤食常會(huì)引起中毒,甚至死亡。一般人由于沒有相關(guān)的專業(yè)知識(shí),有時(shí)也會(huì)因?yàn)椴荒茏R(shí)別河豚魚而誤食引起中毒死亡,尤其是對于各種已經(jīng)加工成魚片、魚糜等產(chǎn)品,很難靠人的感觀來識(shí)別的；近年來,有人故意或無意地把河豚魚下腳料加工成魚片或魚糜,混在其他魚產(chǎn)品中,銷售到市場,甚至是國外,引起了食物中毒事件,這在

2、一定程度上影響了我國的魚糜制品的銷售信譽(yù)。本研究的目的是采用熒光PCR方法,建立了簡便、快速、準(zhǔn)確的河豚魚成分檢測方法,用于相關(guān)魚產(chǎn)品的檢測。
　　 細(xì)胞色素B基因常用于魚類的分類、親緣關(guān)系、魚類物種鑒定、系統(tǒng)發(fā)育的標(biāo)記等,本課題根據(jù)河豚魚細(xì)胞色素B基因序列,設(shè)計(jì)并合成引物和探針,從河豚魚細(xì)胞(組織)中提取DNA,擴(kuò)增細(xì)胞色素B基因片段,回收PCR擴(kuò)增片段,克隆到pGEM-T載體,重組質(zhì)粒經(jīng)篩選、鑒定,抽提質(zhì)粒,梯度稀釋作為陽性

3、標(biāo)準(zhǔn)品,用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定和樣品檢測,通過優(yōu)化Mg2+、酶等反應(yīng)條件,建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)平臺(tái),并對其有效率、敏感性、特異性進(jìn)行了檢測。該檢測技術(shù)對檢測河豚魚成分靈敏度可以達(dá)到100拷貝數(shù)左右,對暗鰭腹刺魨、黑腮兔頭魨、棕斑腹刺魨、陽性質(zhì)粒、青占魚、竹莢魚、魷魚、帶魚、三文魚等進(jìn)行特異性試驗(yàn),結(jié)果只有暗鰭腹刺魨黑腮兔頭魨、棕斑腹刺魨、陽性質(zhì)粒出現(xiàn)了擴(kuò)增曲線。在魚糜中混入一定量的河豚魚魚糜,采用五點(diǎn)采樣法和常規(guī)采樣法進(jìn)行模擬樣品的