抗乙肝病毒多肽藥物C20-MTS的原核細胞表達、純化及其體外功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:乙型肝炎是一種嚴重威脅人類健康和公共衛(wèi)生的全球性傳染病。雖然乙肝的防治已取得了很大進步,但目前仍缺乏療效好、毒副作用低、價格便宜的藥物。因此,尋找新的抗病毒作用靶位,研制與現有藥物不同作用機理的新藥,具有重要的臨床意義。本實驗室前期研究中利用酵母雙雜交系統(tǒng),篩選得到一條與HBV核心蛋白結合能強的多肽序列(C20/C20-MTS)。鑒于前期研究發(fā)現該多肽在表達時形成大量包涵體,且在技術上未能很好地解決其變性及復性問題,本研究主要嘗試

2、對C20/C20-MTS蛋白進行可溶性表達,并在體外檢測該多肽對HepG2.2.15細胞乙肝病毒的抑制效果,從而為開發(fā)針對HBV核心蛋白的新型肽類藥物提供依據。
  方法:通過基因工程技術構建pMAL-c5x-C20/C20-MTS重組質粒,轉化到E.coli Rosatte(DE3)菌株中,探索不同溫度、不同誘導時間和不同IPTG濃度對C20-MTS蛋白可溶性表達的影響;利用親和層析技術純化目的蛋白,之后利用ELISA和West

3、ern blot技術檢測C20/C20-MTS蛋白對HepG2.2.15細胞培養(yǎng)液上清HBsAg和細胞內HBcAg含量的影響。
  結果:成功構建了pMAL-c5x-C20/C20-MTS重組質粒,實現了其在原核細胞中的大量可溶性表達;得到了濃度為0.085mg/ml的C20-MTS蛋白,濃度為0.093mg/ml的C20蛋白,兩者的純度均達到90%;初步藥效顯示:C20-MTS加藥量超過0.1μg/ml時,開始抑制HBV病毒的復

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