1、目的:多發(fā)性硬化(multipie sclerosis,MS)是一種中樞神經系統(tǒng)自身免疫性脫髓鞘疾病,目前MS的發(fā)病機制尚不完全清楚。近年來,越來越多的研究表明:氧化應激在神經系統(tǒng)炎癥反應脫髓鞘及軸突損傷中發(fā)揮著重要的作用。多項研究表明,MS患者及嚙齒動物EAE模型中,存在有氧化應激反應。依達拉奉是國內近幾年開發(fā)上市的一種新型的小分子自由基清除劑,易透過血腦屏障,其主要通過捕獲羥自由基抑制脂質過氧化、抑制腦細胞(血管內皮細胞、神經細胞)

2、過氧化作用,減輕腦水腫和腦組織損傷。近年來有學者發(fā)現(xiàn)依達拉奉可以抑制活化的小膠質細胞的活性氧簇(ROS)和一氧化氮的產生及iNOS mRNA的表達,并減輕小膠質細胞誘導的神經元死亡及樹突毒性現(xiàn)象?；罨男∧z質細胞被認為與炎癥性脫髓鞘疾病的發(fā)病有關,因此提示依達拉奉對MS可能具有治療價值。
　　 本研究采用Wistar大鼠建立EAE模型,應用不同劑量的依達拉奉注射液進行干預,觀察藥物對大鼠發(fā)病情況和組織病理改變的影響,并測定大鼠脊

3、髓中Nrf2及HO-1表達水平的變化,旨在探討依達拉奉對MS的作用及機制,為臨床實踐提供理論基礎。
　　 方法:
　　 1動物分組:將90只6-8周齡健康雌性Wistar大鼠,體重180-200g,隨機分為正常對照組、EAE模型組、地塞米松(dexamethasone,DXM)組、依達拉奉小劑量組(3mg·kg-1·d-1)、依達拉奉大劑量組(10mg·kg-1·d-1),每組各18只。每組又隨機分為7天、16天、23天

4、三個亞組,每個亞組6只大鼠。
　　 2模型制備:將新鮮豚鼠全脊髓制成勻漿,加上完全福氏佐劑(completeFreund's adjuvant,CFA),佐劑中所含卡介苗的劑量為6mg/ml,充分混合抽打制成油包水乳劑,后按0.5ml/只分別于大鼠四肢足墊和背部皮下注射。藥物治療組于模型制備第一天起給予相應劑量的藥物腹腔注射,藥物每天一次持續(xù)給至動物處死時為止。
　　 3神經功能評分:于動物免疫誘導當日及免疫后每天對動物

5、的體重變化、精神狀態(tài)、活動情況進行觀察,并對動物進行神經功能評分,采用Kono等提出的評分標準:1分:動物尾部無力;2分:尾部無力+肢體無力;3分:肢體輕度麻痹;4分:肢體嚴重麻痹,被動翻身后不能復原;5分:瀕死狀態(tài)。
　　 4組織病理學:在動物麻醉狀態(tài)下,快速取其大腦側腦室周圍及脊髓頸、胸、腰膨大處組織,4％多聚甲醛固定,石蠟包埋,組織切片,HE染色和三色染色在光學顯微鏡下觀察組織病理變化。
　　 5脊髓中Nrf-2和

6、HO-1表達的測定:將實驗動物于免疫后第7天、16天、23天時麻醉后快速取脊髓頸、胸、腰膨大處組織,4％多聚甲醛固定,石蠟包埋,組織切片,應用SP法進行免疫組化,光學顯微鏡下觀察陽性細胞,并計數(shù)。
　　 結果:
　　 1動物發(fā)病率觀察:依達拉奉大劑量組和DXM組大鼠的發(fā)病率均低于EAE組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。依達拉奉小劑量組與EAE組大鼠之間的發(fā)病率差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2行為

7、學觀察:各組大鼠在發(fā)病高峰期時神經功能評分比較,依達拉奉大劑量組、DXM組各大鼠神經功能評分明顯低于EAE組(P＜0.05)。依達拉奉小劑量組與EAE組之間神經功能評分差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3組織病理學觀察:在疾病初期,EAE組大鼠組織內即出現(xiàn)炎性細胞浸潤,且炎性細胞數(shù)目的多少與疾病嚴重程度相一致。在發(fā)病高峰期,依達拉奉大劑量組、DXM組大鼠組織內炎癥細胞浸潤形成的血管袖套數(shù)目明顯低于EAE組及依達拉奉小劑

8、量組(P＜0.05);依達拉奉大劑量組和DXM組,EAE組和依達拉奉小劑量組大鼠組織內炎癥細胞浸潤形成的血管袖套數(shù)目差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。疾病緩解期各組大鼠組織(P＞0.05.)。三色染色顯示各組的軸突及髓鞘均發(fā)生破壞,但依達拉奉大劑量組的軸突及髓鞘損傷較EAE組和依達拉奉小劑量組輕。
　　 4脊髓中Nrf-2和HO-1的表達:各組大鼠的Nrf-2和HO-1表達均較對照組上調,依達拉奉大劑量組的表達數(shù)目最高,且與其

9、他組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),EAE組和依達拉奉小劑量組之間的表達差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1 EAE大鼠模型中的Nrf-2和HO-1表達上調,同時依達拉奉大劑量治療組的上調更明顯。
　　 2依達拉奉可以降低EAE大鼠的發(fā)病率,減輕發(fā)病時神經功能損傷的程度。
　　 3依達拉奉可以減輕EAE大鼠大腦和脊髓內炎性細胞浸潤的程度。
　　 4依達拉奉可能是通過