1、目的:原發(fā)性肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高的地區(qū)是亞洲和非洲東南部的一些國家。在我國肝癌發(fā)病率排名為第2位，僅次于肺癌。當(dāng)前統(tǒng)計(jì)我國原發(fā)性肝癌患者人數(shù)占全世界發(fā)病總數(shù)的55％，死亡人數(shù)全世界原發(fā)性肝癌死亡人數(shù)的45％。肝切除術(shù)被認(rèn)為是唯一根治原發(fā)性肝癌的治療方式，但由于該病發(fā)病比較隱匿，并且進(jìn)展迅速的病情特點(diǎn)，多數(shù)患者在就診時(shí)已達(dá)到不能進(jìn)行手術(shù)治療的晚期。目前，原發(fā)性肝

2、癌的非手術(shù)治療包括肝動(dòng)脈栓塞化療術(shù)(TACE)、射頻消融術(shù)(RFA)、經(jīng)皮酒精注射(PEI)、放射治療(RT)及靶向藥物治療等方法。國內(nèi)外已有大量基礎(chǔ)及臨床試驗(yàn)證明放射治療已然成為肝癌一種重要的治療手段。但受到放射性肝損傷及肝臟對(duì)放射線耐受性差的限制，對(duì)比放射劑量與腫瘤控制和正常組織損傷的曲線，若要提高放療效果，不能無限的增加放射劑量。放療增敏劑能夠通過增強(qiáng)放射線對(duì)腫瘤組織尤其是其中乏氧細(xì)胞的作用，從而提高放療效果。血卟啉及其衍生物(H

3、pD)對(duì)腫瘤組織有特異性較強(qiáng)的親和力，可以選擇性濃聚在腫瘤組織內(nèi)，當(dāng)通過特定波長的光激發(fā)后能從低能態(tài)轉(zhuǎn)化到高能態(tài)，從而達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。目前已有許多實(shí)驗(yàn)證實(shí)HpD可增強(qiáng)惡性腫瘤組織對(duì)放射線的敏感性，從而提高放療療效。本實(shí)驗(yàn)旨在探討血卟啉衍生物喜泊分聯(lián)合放療對(duì)小鼠H22肝癌治療及其放療增敏作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立H22肝癌移植瘤小鼠動(dòng)物模型及實(shí)驗(yàn)分組:將50只H22肝癌荷瘤昆明小鼠隨機(jī)分為:

4、對(duì)照組、單純放療組、小劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅰ組）、中劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅱ組）、大劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅲ組）。對(duì)照組在避光10小時(shí)后與各治療組同時(shí)腹腔麻醉;單純放療組在避光10小時(shí)后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅰ組給予喜泊分5mg/Kg尾靜脈注射，避光10小時(shí)后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅱ組給予喜泊分15mg/Kg尾靜脈注射，避光10小時(shí)后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅲ組給予喜泊分20mg/K

5、g尾靜脈注射，避光10小時(shí)后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療。
　　2.自處理開始后，隔日觀察荷瘤小鼠皮下移植瘤的一般生長情況，并測(cè)量其體積，繪制腫瘤生長曲線，計(jì)算腫瘤生長抑制率、q值和增敏系數(shù)。處理后第14天每組處死4只小鼠，剝離腫瘤組織及脾臟，并稱重記錄為瘤重、脾重，計(jì)算腫瘤抑制率及脾臟指數(shù)。每組未處死小鼠任其自然生長，觀察各組小鼠生存時(shí)間，計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組生命延長率并對(duì)所有小鼠進(jìn)行生存分析。
　　3.腫瘤組織石蠟切片并腿染

6、色觀察病理形態(tài)，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)用(x)±s表示。多組樣本間均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析，多組間的兩兩比較分析用S-N-K檢驗(yàn)進(jìn)行，生存分析采用Kaplan-Meier法。各檢驗(yàn)均以P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　喜泊分聯(lián)合放療治療后昆明小鼠皮下移植瘤生長受到抑制，且小鼠

7、生活質(zhì)量較對(duì)照組及單純放療組升高。各聯(lián)合治療組在不同時(shí)間段其q值均＞1，其中以聯(lián)合治療Ⅲ組均值最大。在處理后第14天各組小鼠腫瘤重量分別為7.229±0.204g、5.640±0.343g、5.453±0.448g、5.027±0.258g和4.677±0.381g，單純放療組和聯(lián)合治療組的腫瘤重量明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。放療組、聯(lián)合Ⅰ組、聯(lián)合Ⅱ組及聯(lián)合Ⅲ組腫瘤抑制率分別為21.98％、24.57％、30.46％、35.30％

8、。流式細(xì)胞儀(FCM)分析對(duì)照組、單純放療組及各聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為:3.44±1.06％、7.86±1.58％、14.13±3.25％、20.07±5.42％、29.00±6.82％，聯(lián)合組較其余組凋亡率升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FCM檢測(cè)細(xì)胞周期顯示單純放療組及聯(lián)合組G2/M期細(xì)胞較對(duì)照組增多，各組G2/M期細(xì)胞所占比例分別為9.60±1.730％、11.45±2.520％、14.08±3.398％、22.05±3.313％、

9、26.63±2.938％。5組小鼠生存期比較可見治療組較對(duì)照組小鼠生存時(shí)間均延長，以聯(lián)合治療組最長。單純放療組、聯(lián)合Ⅰ組、聯(lián)合Ⅱ組及聯(lián)合Ⅲ組生命延長率分別為22.59％、49.56％、86.91％、58.21％，以治療聯(lián)合Ⅱ組最長，放療組最短。
　　結(jié)論:
　　1.喜泊分聯(lián)合放療對(duì)小鼠H22肝癌生長及增殖有抑制作用，且在一定范圍內(nèi)其作用與藥物濃度呈正相關(guān)性。以20mg/kg喜泊分聯(lián)合放療組抑瘤作用最強(qiáng)。
　　2.喜泊分

10、對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞有放射增敏作用，且在一定范圍內(nèi)其增敏強(qiáng)度隨喜泊分濃度的增加而增強(qiáng)。以20mg/kg喜泊分放射增敏作用最強(qiáng)。
　　3.喜泊分聯(lián)合放療治療小鼠H22肝癌可延長小鼠生存期。以15mg/kg喜泊分聯(lián)合放療組小鼠生存期最長。
　　4.喜泊分可抑制H22肝癌細(xì)胞生長并增強(qiáng)其放射敏感性的可能機(jī)制是影響細(xì)胞周期分布（將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期）、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　5.在本實(shí)驗(yàn)中，從治療效果、生活質(zhì)量及生存期等角度