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1、目的:檢測(cè)IL-6對(duì)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤化療敏感性的影響,并探討IL-6協(xié)同CD5分子在其腫瘤耐藥中的作用機(jī)制。
方法:(1) IL-6對(duì)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤化療敏感性的影響:①RT-PCR、ELISA法檢測(cè)人源CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(Ho505.T細(xì)胞和Jeko-1細(xì)胞)及CD5-B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(WSU-FSSCL細(xì)胞和DB細(xì)胞)CD5-E1A、CD5-E1B、IL-10、IL-6及其受體(IL-6Rα、gp-130
2、)的表達(dá)水平。②MTS法檢測(cè)四種細(xì)胞自身及IL-6(10ng/ml)預(yù)處理后對(duì)柔紅霉素、長(zhǎng)春新堿的化療敏感性。③Western Blot檢測(cè)柔紅霉素作用后Jeko-1細(xì)胞及IL-6預(yù)處理后Jeko-1細(xì)胞中凋亡抑制蛋白(Bcl2、Bcl-XL、Mcl)的表達(dá)的影響。
(2)選擇CD5+B細(xì)胞淋巴瘤系Jeko-1細(xì)胞及IL-6預(yù)處理Jeko-1細(xì)胞(IL-6-Jeko-1細(xì)胞)為研究對(duì)象,探索IL-6協(xié)同CD5分子在B細(xì)胞淋巴瘤
3、腫瘤耐藥中的作用機(jī)制:①熒光定量PCR及ELISA法檢測(cè)IL-6預(yù)處理前后Jeko-1細(xì)胞CD5-E1B、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-1(DNA methyltransferase-1,DNMT1)和IL-10的表達(dá)變化。②利用anti-IL-6R處理阻斷IL-6信號(hào)通路,熒光定量PCR及ELISA法檢測(cè)阻斷前后IL-6-Jeko-1細(xì)胞CD5-E1B、DNMT1和IL-10的表達(dá)變化。
結(jié)果:①Ho505.T細(xì)胞、Jeko-1細(xì)胞表達(dá)
4、CD5-E1A、CD5-E1B,自分泌IL-10;WSU-FSSCL細(xì)胞、DB細(xì)胞不表達(dá)CD5-E1A、CD5-E1B,不分泌IL-10。②四種淋巴瘤細(xì)胞系均自分泌IL-6,表達(dá)IL-6受體。Jeko-1細(xì)胞IL-6表達(dá)量最高,Ho505.T細(xì)胞和DB細(xì)胞自分泌IL-6的水平次之,WSU-FSSCL細(xì)胞自分泌IL-6的水平最低。③IL-6可不同程度地降低淋巴瘤細(xì)胞對(duì)柔紅霉素、長(zhǎng)春新堿的化療敏感性:化療敏感性依次為WSU-FSSCL細(xì)胞>
5、DB細(xì)胞>Ho505.T細(xì)胞>Jeko-1細(xì)胞,CD5+淋巴瘤細(xì)胞較CD5-淋巴瘤細(xì)胞化療敏感性降低更明顯(P<0.05)。④柔紅霉素作用后IL-6-Jeko-1細(xì)胞較Jeko-1細(xì)胞Bcl2、Mcl蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化,凋亡抑制基因Bcl-XL的表達(dá)上調(diào)。⑤IL-6作用后,Jeko-1 CD5-E1B表達(dá)量升高(P<0.05),DNMT1表達(dá)下調(diào)(P<0.05),IL-10表達(dá)量高(P<0.05)。⑥anti-IL-6R作用后,IL-
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