1、第一部分高血脂對(duì)阿霉素腎病大鼠腎損傷程度影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：比較高脂和普通飼料飼養(yǎng)阿霉素腎病大鼠對(duì)腎臟病變程度的影響，探討炎癥與脂代謝紊亂在腎損害中的相互作用。 方法：雄性Wistar大鼠49只(10～11周齡、體重240～275g)，隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組(N)、高脂飼養(yǎng)組(HF)、阿霉素腎病組(ADR)、阿霉素+高脂飼養(yǎng)組(ADR+HF)。N組予普通飼料喂養(yǎng)，并于實(shí)驗(yàn)開始尾靜脈注射生理鹽水對(duì)照；HF組飼予高脂飼料

2、(高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料+10％豬油+4％膽固醇+1％膽酸鈉)，于實(shí)驗(yàn)開始尾靜脈注射生理鹽水對(duì)照；ADR組飼普通飼料，于實(shí)驗(yàn)開始尾靜脈注射阿霉素6mg/kg；ADR+HF組于實(shí)驗(yàn)開始尾靜脈注射同劑量阿霉素并飼高脂飼料。實(shí)驗(yàn)周期為12周，分別于0、4、8、12周檢測(cè)24h尿蛋白含量，分別于第8周，12周時(shí)，麻醉下摘眼球取血并處死大鼠，檢測(cè)血清TP、ALB、TG、TC、HDL、LDL、BUN、Scr水平；腎組織行HE，PAS病理檢查，冰凍切

3、片行蘇丹Ⅲ染色觀察腎臟脂質(zhì)沉積情況；電鏡下觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：(1)生化指標(biāo)：①24小時(shí)尿蛋白定量：HF組實(shí)驗(yàn)第4、8、12周尿蛋白均較N組有所升高，但無顯著性差異(P>0.05)；ADR組和ADR+HF組從第4周起尿蛋白定量均較N組、HF組明顯升高(P<0.05)，并呈時(shí)間依賴性；ADR+HF組在第8、12周明顯高于ADR組(P<0.05)。②血清白蛋白、總蛋白含量：第8周HF組與N組無差異，第12周ALB較N組降低(P

4、<0.05)，TP與N組無差別；ADR組和ADR+HF組，TP及ALB在第8、12周均低于N組(P<0.05)，且以ADR+HF組降低尤甚，低于ADR組(P<0.05)。③血清脂質(zhì)含量：血清TG：HF組與N組無差別；ADR組及ADR+HF組較N組、HF組明顯升高(P<0.05)，其中ADR+HF組升高尤為明顯，高于ADR組(P<0.05)；血清TC、LDL：8周起各組均較N組升高(P<0.05)，ADR組及ADR+HF組高于HF組(P<

5、0.05)，且ADR+HF組較ADR組升高(P<0.05)；血清HDL：8周時(shí)，ADR組高于N組及HF組(P<0.05)；12周時(shí)，ADR組及ADR+HF組較N組及HF組升高(P<0.05)。④腎功能指標(biāo)：8周，12周時(shí)各組血清BUN、Scr水平差異均無顯著性。(2)病理檢查：①HE染色：8周時(shí)HF組腎小球及小管病變輕微，腎小球及間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；ADR組腎小球細(xì)胞數(shù)增多，管腔內(nèi)蛋白管型，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；ADR+HF組腎小球體積增

6、大，腎小球少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及泡沫細(xì)胞形成，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。12周時(shí)HF組腎小球體積明顯增大，小管上皮細(xì)胞明顯濁腫；ADR組腎小球增大，球囊粘連，腎小球內(nèi)及問質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，數(shù)量較8周時(shí)增加，小管上皮細(xì)胞明顯濁腫，大量蛋白管型；ADR+HF組腎小球內(nèi)及間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增多，并有泡沫細(xì)胞形成，腎小球蒂部也有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，大量蛋白管型。②：PAS染色：8周時(shí)HF組系膜基質(zhì)輕度增寬；ADR組腎小球系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增寬，基底膜

7、局灶增厚；ADR+HF組病變與ADR組類似，程度稍重。12周時(shí)HF組系膜基質(zhì)增寬程度加重：ADR組系膜基質(zhì)明顯增寬，基底膜明顯增厚；ADR+HF組系膜細(xì)胞大量增生，系膜基質(zhì)明顯增寬，基底膜廣泛增厚，其病變程度較ADR組加重，并可見FSGS改變。③蘇丹Ⅲ脂肪染色：8周時(shí)HF組腎小管可見少量脂肪沉積；ADR組腎小球及腎小管均有脂肪沉積；ADR+HF組腎小球、腎小管脂肪沉積明顯，程度較其余組重。12周時(shí)HF組脂肪沉積以腎小管為主，腎小球僅有少

8、量沉積；ADR組及ADR+HF組腎臟脂肪沉積明顯較8周時(shí)加重，且ADR+HF組脂肪沉積廣泛、嚴(yán)重。④電鏡下觀察情況：8周時(shí)HF組足突輕度融合，系膜細(xì)胞輕度增生，腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)少量脂滴沉積；ADR組系膜輕度增生，足突融合，基底膜局灶性增厚，腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積；ADR+HF組足突完全融合，基底膜明顯增厚，系膜區(qū)增寬。12周時(shí)HF組足突局灶融合，小管上皮細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積，病變較8周時(shí)加重；ADR組系膜增生明顯，足突廣泛融合，基底膜明顯增

9、厚，腎小管上皮細(xì)胞水腫，脂滴沉積；ADR+HF組足突消失，基底膜嚴(yán)重增厚，結(jié)構(gòu)不清，系膜大量增生，腎小管水腫、變性，脂滴沉積。 結(jié)論：高膽固醇血癥可引起腎臟炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及足細(xì)胞損傷，小管間質(zhì)損傷較輕；阿霉素腎病小球、小管均有損傷，但在腎臟發(fā)生炎癥病變并伴有高膽固醇血癥時(shí)，腎臟受損程度明顯重于僅有高脂血癥或單純腎臟炎癥所致的腎損害，提示腎組織中炎癥因子和脂質(zhì)的相互作用加重了腎臟損害。 第二部分阿霉素腎病大鼠腎組織中炎癥因子

10、對(duì)LDLr表達(dá)影響的研究。 目的：觀察阿霉素腎病大鼠腎組織中炎癥因子TNF-α對(duì)低密度脂蛋白受體(LDLr)表達(dá)的影響，探討炎癥介質(zhì)與脂質(zhì)在腎損害中的作用以及脂質(zhì)腎損害的發(fā)病機(jī)理。 方法：采用第一部分實(shí)驗(yàn)各組大鼠血清及腎臟組織標(biāo)本；ELISA方法檢測(cè)血清TNF-α含量，免疫組織化學(xué)、Western印跡檢測(cè)腎組織TNF-α、LDLr蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)腎組織LDLr mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：①TNF-a表達(dá)情

11、況：實(shí)驗(yàn)第8周和12周，HF組血清TNF-α水平與N組無差別，但免疫組化及Western blotting法顯示第8周時(shí)HF組腎組織中的TNF-α表達(dá)已開始升高，與N組比較差異有顯著性(P<0.05)。ADR組及ADR+HF組TNF-α血清水平及腎組織中蛋白含量在第8周較N組及HF組升高(P<0.05)，升高程度呈時(shí)間依賴性，且ADR+HF組血清及腎組織中TNF-α水平均較ADR組明顯升高(P<0.05)。②腎組織LDLr蛋白和mRNA

12、表達(dá)從8周起各組均較N組增加(P<0.05)，ADR組升高程度較Ⅲ組明顯(P<0.05)，ADR+HF組升高尤為顯著，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)與HF組，ADR組比較均有差別(P<0.05)，其表達(dá)量的增高呈時(shí)間依賴性。 結(jié)論：腎組織LDLr的表達(dá)不僅受到局部脂質(zhì)水平影響，同時(shí)也受炎癥因子的調(diào)節(jié)。炎癥因子可通過刺激腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞過多表達(dá)LDLr影響局部膽固醇代謝反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，導(dǎo)致脂質(zhì)沉積，這為炎癥介導(dǎo)脂質(zhì)腎損害的觀點(diǎn)提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。反之，組織