1、碩士研究生學(xué)位論文學(xué)校代碼：l0023學(xué)號(hào)：s2007368干細(xì)胞因子對(duì)人白血病細(xì)胞的作用研究研究生姓名：導(dǎo)師姓名：學(xué)科專業(yè)：入學(xué)時(shí)間：所在院所：劉淑艷鄭國(guó)光教授細(xì)胞生物學(xué)2007年9月血液學(xué)研究所二零一零年五月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文干細(xì)胞因子對(duì)人白血病細(xì)胞的作用研究摘要干細(xì)胞因子(stemcellfactor，scF)是一種多功能細(xì)胞因子，參與機(jī)體發(fā)育中多種細(xì)胞的增殖調(diào)控，是多種哺乳動(dòng)物干細(xì)胞增殖分化的關(guān)鍵因子

2、。它可與細(xì)胞表面c—kit受體結(jié)合，作用于早期造血干／祖細(xì)胞，在維持其存活、促進(jìn)增殖、及調(diào)控其向各系造血分化中起重要作用。人SCF由外顯子6蛋白酶解位點(diǎn)選擇性剪接形成可溶型(sSCF)與膜結(jié)合型(mSCF)兩種形式，二者在造血中的作用有所不同。sSCF參與干／祖細(xì)胞的動(dòng)員，而mSCF則被認(rèn)為是造血微環(huán)境“niche“的重要組成分子，參與造血干細(xì)胞與“niche“之間的相互作用，造血微環(huán)境缺乏mSCF導(dǎo)致造血干細(xì)胞重建造血障礙。在惡性實(shí)體

3、腫瘤中，sSCF／c—kit通過自分泌作用促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，而c—kit表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞被認(rèn)為具有腫瘤干細(xì)胞樣性質(zhì)。在血液系統(tǒng)惡性疾病中，63％的急性髓系白血病(AML)患者c—kit表達(dá)陽性，其中2／3同時(shí)伴有異常CD34指標(biāo)的患者不易緩解、易復(fù)發(fā)、預(yù)后不良。以往的研究主要闡明了sSCF通過自分泌機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性表型，我們已有的結(jié)果提示mSCF在部分白血病中有高表達(dá)，在AML患者和正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞中均有sSCF、mSCF

4、、c—kit三種基因產(chǎn)物的表達(dá)，其中AML患者與正常人骨髓細(xì)胞c—kitmRNA、mSCFmRNA水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而sSCFmRNA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本論文在此基礎(chǔ)之上，用DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了人可溶型及膜結(jié)合型干細(xì)胞因子的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體MSCV—PGK—GFP—sSCF、MSCV—PGK—GFP—mSCF，二者與空載體MSCV—PGK—GFP分別轉(zhuǎn)染Phoenix細(xì)胞，包裝出含有目的基因的假病毒顆粒并成功感染了NI

5、H3T3細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)篩選后的陽性克隆經(jīng)合適劑量射線照射后，各自作為滋養(yǎng)層細(xì)胞與c—kit受體陽性的K562細(xì)胞共培養(yǎng)，CCK8法分別檢測(cè)共培養(yǎng)體系中K562細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10％血清濃度條件下共培養(yǎng)48、72小時(shí)，NIH3T3一S、NIH3T3一M孔中的K562細(xì)胞增殖能力均顯著高于NIH3T3一V孔(尺001)，而前兩者K562細(xì)胞的增殖沒有顯著差異(乃005)；1％血清濃度條件下共培養(yǎng)24、48和72小時(shí)，NIH3T3