樣本預處理對膠體金免疫層析試驗敏感性影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:(1)尋找預處理樣品的合適的物理方法,使鼠疫F1抗原從細菌莢膜上脫落下來以增加抗原抗體的反應。(2)比較不同化學試劑對樣品預處理的效果,篩選出其中有效一種或幾種方法。(3)對其中最有效的方法的影響因素進行分析。(4)通過對多項的研究結果的分析,從而確定提高診斷鼠疫抗原膠體金標敏感性的方法。 方法:(1)用分光光度計測定鼠疫菌濃度,建立標準的濃度曲線,得出直線回歸方程。(2)用反復凍融的方法處理鼠疫菌,用膠體金免疫層析試紙條

2、(F I—RGICA)測定最小檢出量和反應時間。(3)微波照射處理16例樣品(A組),并設立對照組(B組),比較最小檢菌量和反應時間,并用t檢驗進行分析。(4)用超聲波對鼠疫菌進行預處理,膠體金標測最小檢出量。(5)對不同化學試劑:溫和劑、變性劑、螯合劑、表面活性劑處理鼠疫菌液效果進行比較。(6)比較不同虹吸角度對金標檢測的影響,并用方差分析其統(tǒng)計學結果。(7)觀察不同離子強度對膠體金的影響。 結果:(1)分光光度計建立的標準濃

3、度曲線:方程A=0.297×1gx—2.220,7億/ml鼠疫菌的光密度A值約為0.42。(2)—70℃~20℃反復凍融,隨著凍融次數的增加,膠體金標最小檢出量逐步上升,由5萬/ml鼠疫菌上升到1000萬/ml。(3)用微波照射樣品組(A組)和對照組(B組),兩組最小檢菌量沒有區(qū)別,反應時間經t檢驗,沒有統(tǒng)計學差異。(4)用超聲波對鼠疫菌進行預處理,膠體金標檢測結果穩(wěn)定在1萬菌/ml。(5)對不同化學試劑預處理鼠疫菌液發(fā)現,表面活性劑作

4、用明顯優(yōu)于溫和劑、變性劑和鰲合劑,其中尤以非離子型化學劑NP40效果最佳,分別建立直線回歸方程,NP40組斜率K為最大。(6)用NP40預處理鼠疫菌液,觀察到0.5%~2.0%范圍的NP40,pH7.0左右,預處理15分鐘以上,能使鼠疫F1抗原溶解釋放,最小檢菌量穩(wěn)定在5000菌/ml。(7)用NP40分別組合其它化學試劑預處理鼠疫菌液后,其最小檢菌量與NP40組沒有明顯差別。(8)改變虹吸角度可使金顆粒均勻釋放,并增加檢測反應線的顯色

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