1、目的:采用細(xì)菌內(nèi)毒素誘導(dǎo)兩種不同的氧化損傷模型,分別探討不同劑量維生素C(VC)預(yù)處理對兩種氧化損傷模型的作用效果,并初步探討其機理。
　　方法:研究一:小鼠單次腹腔注射4mg/kg細(xì)菌脂多糖(LPS),造成急性肝損傷模型。于LPS處理前0.5h分別灌胃給予兩種不同劑量的VC(100mg/kg和500mg/kg),LPS注射后8h和24h分別處死小鼠,測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性、肝臟丙二醛(

2、MDA)含量以及氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)含量并計算GSSG/GSH比值,采用Westernblot法檢測肝臟組織硝基酪氨酸(3-NT)蛋白表達水平,觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)變化。研究二:孕鼠于妊娠第15天時單次腹腔注射LPS(300μg/kg),造成感染性早產(chǎn)和宮內(nèi)死胎模型。于LPS注射前0.5h分別灌胃給予兩種不同劑量的VC(100mg/kg和500mg/kg),其中部分小鼠于LPS處理后不予處死,用于觀察孕鼠早

3、產(chǎn)、死胎發(fā)生率及平均分娩時間,剩余部分小鼠于LPS處理后8h和14h處死,并測定母肝、胎盤中氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)含量,并計算GSSG/GSH比值,采用Westernblot法檢測母肝、胎盤組織中硝基酪氨酸(3-NT)蛋白表達水平,觀察胎盤組織形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果:研究一:對照組小鼠血清ALT、AST活性分別為10.37±3.42(U/L)和62.40±46.40(U/L),肝臟MDA含量為2.86

4、±0.62(μmol/gPro),肝臟GSSG/GSH比值為0.59±0.20。與對照組比較,LPS模型組小鼠血清ALT、AST活性明顯升高,分別為53.90±20.34(U/L)、106.17±10.69(U/L),肝臟MDA含量升高,為4.33±1.32(μmol/gPro),肝臟GSSG/GSH比值升高(0.93±0.41),肝臟3-NT蛋白水平明顯升高,且肝組織細(xì)胞腫脹明顯,可見肝細(xì)胞點狀壞死等病理學(xué)改變。與LPS模型組相比,1

5、00mg/kgVC預(yù)處理可部分逆轉(zhuǎn)LPS引起的上述改變,小鼠血清ALT、AST活性降低,分別為37.41±9.42(U/L)、65.68±31.06(U/L),肝臟MDA含量減少,為3.18±0.57(μmol/gPro),肝臟GSSG/GSH比值降低(0.59±0.06),肝臟3-NT蛋白水平明顯下降,且肝組織病理學(xué)改變明顯改善。而500mg/kgVC預(yù)處理組各項生化指標(biāo)與LPS模型組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異,肝組織病理學(xué)改變亦未見明顯改善

6、。研究二:對照組孕鼠早產(chǎn)、死胎率均為0％,平均分娩時間均為72h,母肝和胎盤中GSSG/GSH比值分別為0.78±0.22和0.36±0.19。與對照組相比,LPS模型組孕鼠早產(chǎn)、死胎率明顯升高(均為100%),平均分娩時間明顯縮短(11h),母肝和胎盤中GSSG/GSH比值明顯升高(2.61±1.73和2.57±2.30),3-NT蛋白水平也均明顯升高,病理可見胎盤組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞明顯,細(xì)胞大量壞死等改變。與LPS模型組相比,VC預(yù)處

7、理可部分逆轉(zhuǎn)LPS引起的上述改變,在500mg/kgVC預(yù)處理組和100mg/kgVC預(yù)處理組中,兩組孕鼠早產(chǎn)率分別為45%和56%,死胎率分別為66%和85%,平均分娩時間分別為53h和40h,母肝中兩組GSSG/GSH比值分別為1.35±0.62、1.62±0.90,胎盤中兩組GSSG/GSH比值分別為1.20±0.81、2.44±1.64,且500mg/kgVC預(yù)處理組的各項指標(biāo)的保護效果均優(yōu)于100mg/kgVC預(yù)處理組(包括肝

8、臟、胎盤的3-NT蛋白水平及胎盤病理改變改善情況)。在500mg/kgVC預(yù)處理組中,活胎胎盤GSSG/GSH比值(0.55±0.30)明顯低于死胎胎盤GSSG/GSH比值(1.41±0.49),活胎胎盤3-NT蛋白水平低于死胎胎盤3-NT蛋白水平。研究一結(jié)果和研究二結(jié)果相比較,研究二中母體肝臟和胎盤GSSG/GSH比值均高于研究一中小鼠肝臟GSSG/GSH比值,且在研究一中100mg/kgVC預(yù)處理效果優(yōu)于500mg/kgVC預(yù)處理,

9、而在研究二中則是500mg/kgVC預(yù)處理效果優(yōu)于100mg/kgVC預(yù)處理。
　　結(jié)論:研究一中,VC在100mg/kg的劑量下,可通過抑制LPS引起的小鼠肝臟氧化應(yīng)激緩解其誘導(dǎo)的急性肝臟損傷,而500mg/kgVC對LPS引起的氧化應(yīng)激及肝損傷的保護作用不明顯。研究二中,VC可通過抑制LPS引起的孕鼠母體及胎盤的氧化應(yīng)激,減輕其導(dǎo)致的早產(chǎn)和宮內(nèi)死胎,且500mg/kgVC對LPS引起的效果明顯優(yōu)于100mg/kg的劑量。由此可