1、免疫抑制作為機(jī)體負(fù)性免疫調(diào)節(jié)的主要過(guò)程，其誘導(dǎo)對(duì)腫瘤免疫，移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有著重要的影響。它的發(fā)生涉及到免疫應(yīng)答過(guò)程中任何一個(gè)正、負(fù)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。克隆不應(yīng)答、免疫活性細(xì)胞激活受阻、缺乏輔助細(xì)胞和抑制細(xì)胞的作用、其他抑制免疫細(xì)胞的抑制作用。樹突細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)最有效的抗原呈現(xiàn)細(xì)胞，在免疫反應(yīng)的啟動(dòng)和免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)過(guò)程中起著決定性作用。在實(shí)驗(yàn)室前期的工作中發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞能引導(dǎo)樹突細(xì)胞免疫耐受在此基礎(chǔ)上對(duì)

2、卵巢癌細(xì)胞引導(dǎo)的免疫抑制樹突細(xì)胞進(jìn)行基因芯片分析，發(fā)現(xiàn)RGS1基因表達(dá)明顯上調(diào)。因此，我們調(diào)查RGS1基在抗腫瘤免疫抑制方面的作用。 第一部分：鼠RGS1基因功能的鑒定 實(shí)驗(yàn)首先建立了鼠RGS1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的RAW264.7細(xì)胞系，然后通過(guò)NF-κB-熒光素酶共轉(zhuǎn)染，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，基因芯片分析及RT-PCR方法從轉(zhuǎn)錄因素、細(xì)胞表面分子的表達(dá)及細(xì)胞因子的分泌三個(gè)方面探討了RGS1基因的功能。結(jié)果表明鼠RGS1基因明顯抑制

3、RAW264.7細(xì)胞NF-κB轉(zhuǎn)錄因素的活性，升高細(xì)胞表面CD40、CD86、B7-H1和PD1分子的表達(dá)，降低CD80表達(dá)。同時(shí)對(duì)細(xì)胞因子IL6、IL10、IL12的表達(dá)也有明顯的影響，其中IL6的表達(dá)升高；IL10、IL12的表達(dá)降低。在經(jīng)過(guò)不同的Tolllikereceptor配體(LPS、POLYI：C、PGN、BDNA)刺激后，比較鼠RGS1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的RAW264.7細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞系，RGS1基因明顯抑制了各種Tollli

4、kereceptor配體(LPS、POLYI：C、PGN、BDNA)對(duì)RAW264.7細(xì)胞的活化作用，說(shuō)明RGS1基因可能對(duì)Tolllikereceptor途徑存在的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。 第二部分：人RGS1基因成功克隆與功能的初步鑒定 實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR方法克隆了人RGS1基因，用InvitrogenpcDNA3.1/V5-His(C)TOPO(R)TAExpressionKit將其連接到pcDNA3.1/V5表達(dá)載體。然

5、后以連接的質(zhì)粒為基礎(chǔ)通過(guò)化學(xué)發(fā)光及ELISA方法對(duì)人RGS1基因的功能進(jìn)行了初步的研究。結(jié)果顯示RGS1對(duì)293T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因素NF-κB的活性有明顯的抑制作用，同時(shí)改變樹突細(xì)胞細(xì)胞因子IL6、IL10、IL12的表達(dá)。初步證明了人RGS1基因功能的實(shí)驗(yàn)也同樣存在免疫調(diào)節(jié)功能。 鼠RGS1基因在單核巨噬細(xì)胞系中表現(xiàn)出明顯的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)對(duì)于不同Tolllikereceptor途徑(TLR2、TLR3、TLR4、TLR9)對(duì)