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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究miR21的表達(dá)對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞順鉑敏感性的影響及影響機(jī)制,為宮頸癌的有效治療提供理論依據(jù)。
方法:
實(shí)驗(yàn)分四組進(jìn)行,miR21下調(diào)組、miR21上調(diào)組、陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中miR21基因的表達(dá)水平;cck-8比色法檢測(cè)各組細(xì)胞對(duì)順鉑的 IC50值;Annexin V/PI法檢測(cè)順鉑處理后各組細(xì)胞的凋亡率;實(shí)時(shí)熒光定量 PCR和蛋白印跡法分別從 m
2、RNA和蛋白水平檢測(cè)順鉑對(duì)各組細(xì)胞中PTEN、PDCD4的影響。
結(jié)果:
1、qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中miR21的表達(dá)水平結(jié)果顯示:下調(diào)組miR21的表達(dá)明顯低于陰性對(duì)照組,上調(diào)組 miR21的表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組。
2、cck-8比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:順鉑對(duì)下調(diào)組的 IC50值為(2.44±0.69) ug/ml,顯著低于陰性對(duì)照組細(xì)胞(3.96±0.07)ug/ml;上調(diào)組細(xì)胞(6.93±0.
3、07) ug/ml顯著高于陰性對(duì)照組細(xì)胞。
3、Annexin V/PI法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:5ug/ml順鉑誘導(dǎo)下調(diào)組的凋亡率為(64.36±2.47)%,顯著高于陰性對(duì)照組細(xì)胞(4.2±0.17)%;5ug/ml順鉑誘導(dǎo)上調(diào)組細(xì)胞(0.06±0.03)%顯著低于陰性對(duì)照組細(xì)胞(4.2±0.17)%。
4、qRT-PCR檢測(cè) PTEN、PDCD4實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:下調(diào) miR21在細(xì)胞的表達(dá)后 PTEN、PDCD4的 mRN
4、A表達(dá)顯著高于陰性對(duì)照組,上調(diào) miR21在細(xì)胞的表達(dá)后PTEN、PDCD4的mRNA表達(dá)明顯低于陰性對(duì)照組。
5、蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測(cè)PTEN、PDCD4實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:下調(diào)miR21在細(xì)胞的表達(dá)后 PTEN、PDCD4的蛋白表達(dá)顯著高于陰性對(duì)照組,上調(diào)miR21在細(xì)胞的表達(dá)后PTEN、PDCD4的蛋白表達(dá)明顯低于陰性對(duì)照組。
結(jié)論:
基因轉(zhuǎn)染技術(shù)能有效上調(diào)或下調(diào)宮頸癌細(xì)胞系Siha
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