1、目的:本課題通過LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞，建立體外炎癥細胞模型，觀察蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7的細胞釋放NO、TNF-a和IL-1β的影響，以及蘆薈大黃素對ERK、iNOS蛋白表達和NF-κB信號通路下游基因表達的影響，探討蘆薈大黃素抗內(nèi)毒素作用及其機制。
　　方法:采用MTT法，制備RAW264.7細胞生長曲線;采用Griess法，檢測蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO量;采用ELISA，檢

2、測蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放的TNF-a和IL-1β量;采用Western blot法，研究蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞ERK、iNOS蛋白表達和磷酸化水平的影響;采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)，研究蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7 NF-κB信號通路下游基因表達的影響。
　　結(jié)果:1.40μM、2OμM、15μM、10μM、5μM、0.1μM的蘆薈大黃素對RAW264.7細胞增殖沒有顯著的影響。

3、r>　　2.陽性藥10μM NF-κB抑制劑BAY-11-7082以及20μM蘆薈大黃素、20μM大黃酸、40μM大黃素對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO的抑制作用明顯，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而8μM大黃素甲醚與8μM大黃酚對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO的抑制作用不明顯，與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.和模型組相比，20μM、10μM的蘆薈大黃素以及陽性藥BAY11-7082都能

4、夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO、TNF-a、IL-1β，并且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而5μM的蘆薈大黃素對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放NO、TNF-a、IL-1β抑制作用不明顯(P＞0.05)。
　　4.在1μg/ml的LPS刺激下，RAW264.7細胞中iNOS蛋白表達、ERK蛋白磷酸化水平水平顯著提高。而在蘆薈大黃素存在的情況下，LPS刺激后的iNOS蛋白表達、ERK磷酸化水平顯著降低。本實驗

5、結(jié)果說明蘆薈大黃素能夠抑制由LPS引起的細胞內(nèi)iNOS蛋白表達、ERK磷酸化水平。
　　5.TNF-a能刺激HELA細胞表達更多的NF-κB，模型組與空白組有顯著性差異(P＜0.01)，陽性藥BAY11-7082能顯著抑制TNF-a刺激的HELA細胞活化NF-κB，并且與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。但不同濃度的蘆薈大黃素不能抑制TNF-a刺激的HELA細胞表達NF-κβ。
　　結(jié)論:本實驗研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素能