1、目的:
　　通過對杜仲黃酮類單體的深入研究篩選出杜仲黃酮類單體中具有促進成骨分化作用的單體并對其作用的分子機制做初步研究。
　　方法:
　　實驗選取杜仲黃酮類單體槲皮素、蘆丁、金絲桃苷協(xié)同經(jīng)典成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)培養(yǎng)第3代SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,依次分為7組分別為50ug/ml、10ug/ml、2ug/ml、0.4ug/ml、0.08ug/ml單體+成骨誘導(dǎo)液組、陽性對照組(誘導(dǎo)劑為10mmol/l的β-甘油磷酸鈉,10-

2、7mmol/l地塞米松,50mg/l維生素C)、陰性組(加入與誘導(dǎo)液等體積的 PBS);各組于誘導(dǎo)分化后24天停止培養(yǎng),并分別于第7天、14天、24天進行堿性磷酸酶染色及堿性磷酸酶活力測定、實時熒光定量PCR(real time PCR)檢測、茜素紅染色,分別鑒定成骨細胞標(biāo)志性分泌物堿性磷酸酶、檢測成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子 Runx2及 Osterix表達水平及成骨分化終產(chǎn)物礦化結(jié)節(jié),最后通過SPASS軟件統(tǒng)計分析各單體促成骨分化的作用。<