1、目的：本實驗旨在探討漢防已甲素(TET)在逆轉(zhuǎn)人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變細胞株K562及其耐藥細胞株K562/A02細胞耐藥與耐藥相關(guān)性可溶性鈣結(jié)合蛋白(sorcin)及其基因、細胞周期依賴性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P-gp)及其基因之間的關(guān)系,探討藥物的可能機制,為TET的臨床應(yīng)用提供新的理論基礎(chǔ)。 方法：通過四甲基偶氮唑藍(MTT)法篩選出所需濃度TET,與K562/A02細胞株孵育培養(yǎng)48/72小時后,通過

2、MTT比色法檢測TET對DNR細胞毒性的影響；通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測細胞sorcin基因表達的變化,蛋白質(zhì)斑跡法方法檢測細胞sorcin蛋白表達的變化；通過Western blot方法檢測細胞p21蛋白表達的變化,通過RT-PCR方法檢測細胞多藥耐藥基因mdrl的mRNA表達的變化,流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞P-gp的表達。 結(jié)果：(1)MTT法篩選結(jié)果:TET單藥48小時對K562及K562/A02細

3、胞株的IC50均大于4mg/L。(2)TET對DNR細胞毒性的影響：在所選濃度范圍內(nèi),TET不增強DNR對K562的細胞毒作用,可以增強DNR對K562/A02的細胞毒作用(48小時TET濃度為0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L時DNR的IC50分別為11.34±0.86mg/L,5.72±0.42mg/L,3.68±0.42mg/L和2.56±0.24mg/L,p<0.05;72小時TET濃度為0mg/L、0.

4、5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L時DNR的IC50分別為8.01±0.79mg/L,3.91±0.55mg/L,2.65±0.26mg/L和2.00±0.06mg/L,p<0.05)。(3)細胞sorcin基因表達的變化:K562/A02細胞中sorcin基因高表達,48小時時隨著TET濃度的增加sorcin基因的表達不斷變化(TET濃度為0.5mg/L時增強,1.0mg/L、2.0mg/L時減弱,p<0.05;72小時時隨著

5、TET濃度的增加sorcin基因的表達也不斷變化(TET濃度為1.0mg/L時增強,0.5mg/L、2.0mg/L時減弱,p<0.05)。(4)細胞sorcin蛋白表達的變化:K562細胞中sorcin蛋白低表達,K562/A02細胞中sorcin蛋白高表達,48小時時隨著TET濃度的增加不斷變化(TET濃度為0.5mg/L時增強,1.0mg/L、2.0mg/L時減弱,p<0.05;72小時時隨著TET濃度的增加sorcin蛋白的表達也

6、不斷變化(TET濃度為1.0mg/L時增強,0.5mg/L、2.0mg/L時減弱,p<0.05)。(5)細胞p21蛋白表達的變化：在所選濃度范圍內(nèi),p21的表達隨著TET濃度的增加逐漸增強(p<0.05)。(6)細胞mdrl基因表達的變化:K562細胞中mdrl幾乎不表達,K562/A02細胞中mdrl基因高表達,隨著TET濃度的增加mdrl基因的表達逐漸減弱(p<0.05)。(7)細胞P-gp蛋白的表達變化:K562細胞中P-gp表達