1、目的：
　　 前期的體內研究發(fā)現(xiàn)亞硫酸鹽可引起肝細胞內出現(xiàn)明顯的脂滴沉積，本次實驗擬通過體外實驗觀察亞硫酸鹽染毒后肝細胞內甘油三酯含量變化情況和極低密度脂蛋白(VLDL)分泌外排的關鍵蛋白分子改變情況，以探討亞硫酸鹽的肝損傷可能途徑。
　　 方法：
　　 將人肝癌細胞株(HepG2)培養(yǎng)于含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，待細胞生長至對數(shù)生長期，用0.25％胰蛋白酶溶液消化，將細胞調成一定密度的單細胞懸液，接種

2、于培養(yǎng)板中。細胞融合至一定程度后，用不同濃度的亞硫酸鈉(Na2SO3)對細胞進行染毒，其終濃度為0、0.039、0.156、0.625、2.5、10mmol/L，并以四氯化碳(CCL4)染毒組作為Na2SO3的陽性對照，以完全培養(yǎng)基組作為陰性對照。采用乳酸脫氫酶(LDH)活力測定法檢測肝細胞膜的通透性變化；采用CCK-8法檢測肝細胞的活性改變；采用油紅O染色法觀察肝細胞內脂肪沉積情況，采用酶化學法檢測肝細胞內甘油三酯(TG)含量；采用相

3、應抗體進行蛋白印跡(westernblot)分析分別檢測ARF-1、COPI等蛋白表達水平；采用熒光定量PCR法檢測ARF-1、COPI、APOE等基因的表達水平。
　　 結果：
　　 1、LDH活性檢測分析顯示：染毒24h后10mmol/LNa2SO3可使肝細胞培養(yǎng)上清中LDH活性增加(p＜0.05)，釋放率升高，與陰性對照組相比有顯著性差異，其余各染毒組與對照組相比無顯著性差異。染毒48h和72h后各染毒組培養(yǎng)上清中

4、LDH的活性與對照組相比無顯著性差異。
　　 2、CCK-8試驗顯示：處理24h、48h后各組HepG2細胞的存活率隨Na2SO3劑量的增加而降低，與培養(yǎng)基對照組相比有顯著性差異(p＜0.05);染毒72h后，除0.039mmol/L組外，其他組細胞的存活率與培養(yǎng)基對照組相比均有顯著性差異(p＜0.05）。
　　 3、油紅O染色法觀察發(fā)現(xiàn)，染毒24h～48h后部分染毒組細胞內出現(xiàn)了極少量的脂滴，而陰性對照組卻沒有。染毒7

5、2h后10mmol/L的Na2SO3處理組出現(xiàn)明顯脂滴。
　　 4、酶化學法檢測肝細胞內TG試驗顯示：染毒24h后，2.5mmol/LNa2SO3和1mmol/L油酸可使肝細胞內TG含量明顯增高，與對照組相比有明顯差異(p＜0.05）；染毒48h后，10mmol/LNa2SO3和1mmol/L油酸染毒組TG含量顯著增高(p＜0.05），分別為對照組的62.71倍和7.47倍；染毒72h后，2.5mmol/L、10mmol/LNa

6、2SO3染毒組和1mmol/L油酸組與對照組相比較差別有統(tǒng)計學意義(p＜0.05）。
　　 5、Westernblot實驗顯示Na2SO3染毒作用24h后，ARF-1和COPI蛋白表達無明顯變化；染毒作用48h和72h后肝細胞內ARF-1和COPI蛋白表達有隨染毒劑量的增加而增加的趨勢，其中2.5mmol/L、10mmol/L亞硫酸鈉染毒組ARF-1和COPI蛋白表達明顯增加。
　　 6、亞硫酸鈉染毒作用24h后，各劑量

7、組HepG2細胞內ARF-1基因表達水平明顯降低，0.039mmol/L，2.5mmol/L及10mmol/L染毒組細胞內COPI基因表達水平，及0.156mmol/L和2.5mmol/LNa2SO3組細胞內APOE基因的表達水平明顯降低，與陰性對照組相比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；染毒作用48h后，僅0.039mmol/L亞硫酸鈉作用組細胞內APOE基因表達水平低于對照組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；染毒作用72h后，0.

8、039mmol/L亞硫酸鈉作用組細胞內APOE基因表達水平仍低于陰性對照組(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1、Na2SO3對肝細胞活性有明顯的抑制作用，且呈一定的劑量—反應關系。
　　 2、高濃度Na2SO3染毒可增加肝細胞膜的通透性，并且引起肝細胞內甘油三酯蓄積。
　　 3、Na2SO3染毒可增加肝細胞內ARF-1和COPI蛋白表達。
　　 4、Na2SO3對肝細胞ARF-1、COPI和