1、本文研究目的：研究FK228對TNFα誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞HepG2核轉(zhuǎn)錄因子κB (nuclear factor-κB，NF-κB)活化及其NF-κB調(diào)節(jié)的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響，探討FK228的抗腫瘤作用機(jī)制和潛在的抗炎機(jī)制，為下一步FK228體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 研究方法：培養(yǎng)HepG2細(xì)胞于對數(shù)生長期分別用TNFα刺激和FK228+TNFα共同作用，Western blot分析細(xì)胞核中NF-κBp65及其細(xì)胞漿中抑

2、制因子IκBα的表達(dá)；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率改變；用RT-PCR技術(shù)檢測FK228對TNFα激活的HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2和炎癥相關(guān)基因IL-6、IL-8 mRNA表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x4-s)表示，用SPSS11.5軟件作統(tǒng)計(jì)分析。采用ANOVA和LSD進(jìn)行組間比較和兩兩比較，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)果：Western Blot結(jié)果顯示TNFα(20ng/ml)刺激30min

3、即能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2的NF-κBp65的核轉(zhuǎn)移，組蛋白去乙酰化酶抑制劑FK228 (4ng/ml～32ng/ml)能抑制TNFα-誘導(dǎo)的NF-κBp65的活化，各干預(yù)組(FK228+TNFα)中FK228各劑量組與TNFα刺激組均有顯著差異(P<0.05)；FK228減少胞漿中IκBα的降解且各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)K228干預(yù)組(FK28+TNFα)細(xì)胞凋亡率15.51±0.39％明顯

4、高于TNFα刺激組凋亡率4.05±0.30％，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；RT-PCR檢測顯示，F(xiàn)K228能明顯減少TNFα誘導(dǎo)的Bcl-2、IL-6、IL-8 mRNA的表達(dá)。 研究結(jié)論： 1．TNFα能激活人肝癌細(xì)HepG2的NF-κB，而NF-κB可能參與了抗凋亡蛋白Bcl-2及炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-8的表達(dá)調(diào)控，且在一定程度上抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥發(fā)生發(fā)展。 2．FK228能抑制TNFα誘