1、基因組印記是一種表觀遺傳現(xiàn)象，印記基因具有單等位表達和親本特異性。通過每個染色體的印記可以對其親本來源進行判斷。然而印記標記的機制研究表明，DNA甲基化在基因組印記現(xiàn)象中起重要作用，因此甲基化動態(tài)和印記機制成為研究熱點。大部分印記基因成簇存在，絕緣子調(diào)控模型或長鏈非編碼RNAs調(diào)控模型對其表達進行調(diào)控。越來越多的證據(jù)表明DNA甲基化不僅僅與印記基因表達相關(guān)，同時，印記基因的表達調(diào)控還與翻譯后組蛋白修飾有關(guān)。
　　目前，對基因組印記

2、的研究主要集中在人和小鼠中，在家畜，特別是豬的研究較少。因此在豬鑒定印記基因?qū)τ诨蚪M印記在物種間的保守性研究具有重要意義。此外，家畜大多數(shù)印記基因是調(diào)控生長發(fā)育的主效基因，這些基因?qū)ε咛ピ缙诎l(fā)育、出生后的生長速度、產(chǎn)肉量、瘦肉率、飼料效率等數(shù)量性狀有極大影響?；谟∮浕蛟谏L和發(fā)育中的重要調(diào)控作用，鑒定出豬新的印記基因是一個值得探討的新課題。
　　本研究主要進行了以下三個方面的工作：
　　(1)利用巴克夏豬×皖南黑豬和皖

3、南黑豬×巴克夏豬正反交模型，通過RT-PCR-RFLP方法分析和PCR產(chǎn)物克隆測序法檢測“表達的SNP”，鑒定了豬候選印記基因——Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1（Rasgrf1）基因的印記狀態(tài)，及其與其他物種間的保守性。
　　(2)Rasgrf1基因轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的檢測。
　　(3)針對豬Rasgrf1基因具有組織特異性的印記表達現(xiàn)象，初步探索該基因在豬中的印記機制。
　　結(jié)果如下：
　　1.豬Rasgr

4、f1基因的印記狀態(tài)和表達模式。Rasgrf1在小鼠上鑒定為印記基因，在家豬中Rasgrf1序列以及印記狀態(tài)未曾報道過。本試驗得到豬Rasgrf1基因的部分序列，鑒定了該基因的印記狀態(tài)和表達模式，克隆了該基因第1和第14外顯子的保守序列（分別為228bp和193 bp），檢測到第14外顯子G/A突變。以Rasgrf1基因SNP為雜合子的F1代為對象，檢測了Rasgrf1基因在1日齡的印記狀態(tài)。印記分析結(jié)果表明：Rasgrf1基因在豬的印記

5、情況與在小鼠和人上存在顯著差異；該基因在肝組織和小腸組織中母源性表達，在肺組織中父源性表達，在大腦、垂體、心、脾、腎、胃、胰臟、脂肪、睪丸、卵巢、背最長肌中雙等位基因都表達。本試驗結(jié)果提示，Rasgrf1基因的印記狀態(tài)存在物種和組織差異。
　　2. Rasgrf1基因轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的檢測。Q-RT-PCR表明不同組織中Rasgrf1基因表達水平存在差異；巴克夏豬♂與皖南黑豬♀雜交、皖南黑豬♂與巴克夏豬♀雜交產(chǎn)生的F1代各8只進

6、行mRNA表達測定，Rasgrf1基因具有相似的表達模式。在腦、垂體、胰腺高豐度表達，其次是腎、胃、肺、睪丸、小腸、卵巢、脾臟和肝臟，在背最長肌、心臟和背膘中表達水平低。并且在腦、垂體和胰腺組織中巴克夏豬♂與皖南黑豬♀雜交F1代表達高于皖南黑豬♂與巴克夏豬♀F1代。
　　本試驗選取了Rasgrf1基因雙等位基因表達的兩種組織（心和脾），單等位基因表達的兩種組織（肝和小腸）進行Rasgrf1基因編碼的蛋白質(zhì)分布的研究。激光共聚焦顯微

7、鏡觀察的結(jié)果表明，該蛋白圍繞細胞核分布，主要存在細胞質(zhì)和細胞間質(zhì)中，提示該蛋白參與細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　3. Rasgrf1基因啟動子區(qū)的確定、啟動子區(qū)CpG島和調(diào)控區(qū)CTCF的預(yù)測對Rasgrf1基因調(diào)控區(qū)的甲基化進行分析。結(jié)果表明，預(yù)測的豬Rasgrf1基因5’端上游啟動子區(qū)CpG島和Rasgrf1與mir-184基因間區(qū)CTCF均顯示為低甲基化狀態(tài)。不同于小鼠和大鼠Rasgrf1基因核心啟動子區(qū)域CpG島甲基化狀態(tài)，提示豬R