1、第一部分改良三袖套法建立大鼠左肺原位移植動物模型
　　 目的:采用改良袖套法技術建立大鼠同種異體左肺移植模型。方法：對供肺獲取、套管制作、自體肺切除、血管和氣管袖套套接技術進行改進。30例清潔級SD大鼠左供肺獲取后置于4℃的LPDG液保存3小時，隨后行肉眼直視下同種異體左肺移植術，再灌注4h后阻斷右肺門，分別測定阻斷前后氣道壓力、動脈血氣變化、肺濕/干重比率及光鏡下肺組織結構變化。評價該模型復制移植物缺血再灌注損傷的能力。結果：

2、同種異體左肺移植模型在肉眼直視下單人完成，供受體動靜脈和支氣管套管吻合時間分別為：肺動脈(5±1)min、肺靜脈(9±4)min、支氣管(2±0.5)min?？偸中g時間(59±10)min。手術成功率90％(27/30)，術后生存率100％。實驗結果顯示該模型成功復制出同種異體肺移植缺血再灌注損傷的變化。結論：本模型符合大鼠肺移植模型建立的優(yōu)點，全部操作在肉眼直視下單人完成；供肺的獲取較為快速，使用的套管更簡單，套管技術趨于簡化，肺移植

3、時血管套接技術成功率高，整體手術時間操作縮短。該模型復制出移植肺缺血再灌注損傷的變化，是適合肺移植缺血再灌注損傷研究的理想模型。
　　 第二部分骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定、標記及其對大鼠移植肺缺血再灌注損傷的保護作用
　　 目的：分離、培養(yǎng)、鑒定和標記骨髓間充質干細胞(BMSCs)，觀察BMSCs對大鼠左肺移植物缺血再灌注損傷的保護作用并探討其作用機制。方法：以SD大鼠為供受體，采用改良袖套法技術建立同種異體左肺

4、移植模型。設立假手術組(A組)、I/R組(B組)和BMSCs組(C組)，每組n=7，離體供肺靜脈4℃的LPDG液逆行灌注，灌注后行左肺原位移植，移植肺再灌注4h后，阻斷右肺門，測量氣道壓力，動脈血PaO2、PaCO2。隨后處死大鼠，分別測定：肺W/D比率、肺組織中SOD活性、MDA含量、MPO活性；光鏡觀察移植物病理組織學變化；RT-PCR和Western-blot了解旁分泌因子VEGF的表達：ELISA檢測受鼠血漿中TNF-a和IL-

5、10的變化；免疫組化檢測TNF-a和bcl-2表達情況；TUNEL法檢測移植肺細胞凋亡水平。結果：與假手術組相比，I/R組氣道壓力升高、Pa02下降、肺W/D比率上升，SOD活性降低，MDA含量和MPO活性升高(P＜0.01)，表明I/R組相對于假手術組確實造成了明顯的缺血再灌注損傷；與I/R組相比，BMSCs組氣道壓力降低、PaO2上升、肺W/D比率下降，SOD活性增高，MDA含量和MPO活性下降(P＜0.01)：與I/R組相比，BM

6、SCs組：血漿TNF-a水平降低，IL-10水平升高；病理檢查肺泡間質水腫明顯減輕，炎癥細胞浸潤減少，肺泡腔內水腫液和紅細胞少見；免疫組化TNF-a表達減弱、bcl-2表達增強(P＜0.01)；TUNEL法檢測移植肺細胞凋亡減少(P＜0.01)?；蚝偷鞍姿綑z測顯示BMSCs組肺組織旁分泌因子VEGF較假手術組、I/R組明顯升高(P＜0.01)。結論：(1)氧化損傷等指標檢測表明I/R組確實復制了移植肺的IRI：BMSCs移植能減輕移

7、植肺的缺血-再灌注損傷。(2)BMSCs通過其抗氧化、抗炎、抗凋亡和旁分泌效應等抗損傷、促組織修復等多種途徑明顯減輕移植肺缺血再灌注損傷，提高肺移植術后早期肺功能。因此BMSCs移植可成為預防和減輕肺移植術后缺血再灌注損傷的一種有益嘗試。
　　 第三部分缺血后適應基礎上骨髓間充質干細胞移植對大鼠移植肺缺血再灌注損傷的保護作用
　　 目的：觀察缺血后適應(I-postC)基礎上BMSCs移植對大鼠同種異體左肺移植物缺血再灌

8、注損傷的保護作用并探討其作用機制。方法：以SD大鼠為供受體，采用改良三袖套法技術建立同種異體左肺移植模型。設立I/R組(A組)， I-postC組(B組)，BMSCs組(C組)和I-postC+BMSCs組(D組)，每組n=14，離體供肺靜脈4℃的LPDG液逆行灌注，灌注后行左肺原位移植，移植肺再灌注4h和72h后，分別隨機抽取大鼠7只阻斷右肺門，測量氣道壓力，動脈血PaO2、PaCO2。隨后處死大鼠測定：肺W/D比率、肺組織中SOD活

9、性、MDA含量、MPO活性；光鏡觀察移植物病理組織學變化；RT-PCR和Western-blot了解旁分泌因子VEGF的表達；ELISA檢測受鼠血漿中TNF-a、IL-10、G-CSF和GM-CSF的變化；免疫組化檢測TNF-a和bcl-2表達情況；TUNEL法檢測移植肺細胞凋亡水平。免疫熒光法檢測肺組織中BMSCs的定位情況。結果：基因和蛋白水平檢測顯示單純BMSCs組、I-postC+BMSCs組肺組織旁分泌因子VEGF表達較I/R

10、組、I-postC組明顯升高(P＜0.01)；G-CSF，GM-CSF(72h)明顯升高(P＜0.01)。與I/R組比較，I-postC組、BMSCs組、I-postC+BMSCs組：TNF-a明顯降低，IL-10明顯升高(P＜0.01)；氣道壓力降低、PaO2上升、肺W/D下降、SOD活性增高、MDA含量和MPO活性下降(P＜0.01)；bcl-2表達增強，TUNEL法檢測移植肺細胞凋亡減少(P＜0.01)。與I/R組、I-postC

11、組、BMSCs組相比，光鏡檢查I-postC+BMSCs組肺泡間質水腫減輕最顯著，炎性細胞浸潤、肺泡腔內水腫和滲出改變減輕最明顯。免疫熒光法檢測72h取的肺組織，BMSCs在肺組織中定位，主要分布在肺細支氣管壁周圍。結論：在I-postC的基礎上，再行BMSCs移植，減輕移植肺缺血再灌注損傷的程度最顯著。I-postC基礎上BMSCs移植減輕移植肺IRI、提高肺移植術后早期肺功能的機制與其抗氧化、抗炎、抗凋亡、旁分泌效應和干細胞歸巢等密