1、目的：建立體外誘導(dǎo)骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞模型,比較氧化低密度脂蛋白對骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞及血管平滑肌細胞泡沫化的影響,探索分化的平滑肌細胞在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的作用。 方法：采用貼壁法從SD大鼠骨髓中分離骨髓間質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC),從胸主動脈分離血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)。運用條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)B

2、MSC分化成SMC,采用免疫熒光法分析骨髓間質(zhì)干細胞及其分化后的細胞特異性標志物。80mg/L ox-LDL分別處理骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞和VSMC 0、12、24、48、72小時；0、20、40、80mg/L ox-LDL分別處理骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞和血管平滑肌細胞72小時，油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴，HPLC檢測細胞內(nèi)的總膽固醇、膽固醇酯含量。Western bloting檢測細胞清道夫受體CD36的表達變化。

3、 結(jié)果： 1、分離的BMSC呈長梭形,免疫熒光檢測細胞表達CD44,但不表達CD34,呈骨髓間質(zhì)干細胞表型。用含堿性成纖維細胞生長因子(b-FGF)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)的條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化15天后，誘導(dǎo)分化的細胞形態(tài)呈梭形平滑肌樣。表達平滑肌細胞特異性蛋白標志物α-肌動蛋白和平滑肌肌球蛋白重鏈1，呈平滑肌細胞表型,命名為骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞(smooth muscle cell differentiated

4、from bone mesen-chymal stem cell, BMSC-SMC）。 2、骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞（BMSC-SMC ）經(jīng)80mg/L的ox-LDL處理0、12、24、48、72小時，隨著處理時間延長，細胞內(nèi)總膽固醇含量、膽固醇酯含量逐漸增加，到72小時細胞內(nèi)總膽固醇含量達304.3±26.4μg/mg蛋白，較未處理時的28.8±3.6μg/mg蛋白增加了9.5倍，差異有顯著性（P〈0.05）；膽固醇酯

5、/總膽固醇值為70.1％，較未處理時增加了2.2倍，差異有顯著性（P〈0.05）；符合泡沫細胞特征。相同處理的VSMC（80mg/L ox-LDL，處理72小時）細胞內(nèi)總膽固醇含量為215.7±18.9μg/ mg蛋白，膽固醇酯/總膽固醇值為60.1 ％，與BMSC-SMC比較，差異均有顯著性（P〈0.05）。 在量效關(guān)系方面，0、20、40、80mg/L ox-LDL，處理BMSC-SMC72小時，細胞內(nèi)總膽固醇含量分別為29

6、.4±2.2、137.3±7.3、171.3±11.7、295.9±20.3μg/mg；膽固醇酯/總膽固醇值分別為23.6％、38.4％、48.8％、68.5％，提示隨著 ox-LDL濃度增高，細胞內(nèi)總膽固醇、膽固醇酯含量逐漸增加。BMSC-SMC與相同處理的VSMC細胞內(nèi)總膽固醇、膽固醇酯/總膽固醇值比較，增幅較大，差異均有顯著性（P〈0.05）。 80mg/L ox-LDL作用細胞72小時，油紅O染色觀察到BMSC-SMC體

7、積增大、細胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，呈典型的泡沫細胞形態(tài),且細胞內(nèi)脂滴較VSMC明顯增多。 3、Western bloting檢測發(fā)現(xiàn)，未處理BMSC-SMC少量表達清道夫受體CD36，經(jīng)80mg/L ox-LDL處理72小時后,CD36表達顯著增加,相同處理VSMC 的CD36表達亦增高，但其增加幅度遠較BMSC-SMC為?。≒〈0.05）。 結(jié)論： 1、在ox-LDL的作用下骨髓細胞干細胞分化的平滑肌細胞能大量蓄積膽