1、背景和目的 原發(fā)性肝細胞癌(HCC)是一種常見惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿，早期無明顯的癥狀，而且惡性程度高、進展快，臨床就診時約2/3的患者已屬中晚期，五年生存率很低，因此，早期診斷是提高肝癌療效的關(guān)鍵因素之一。AFP是目前最常用的檢測肝癌的比較敏感和可靠的血清學指標，大約60-70％的肝癌患者血清AFP陽性。尋找出一個新的、在AFP陰性血清也能檢測到的特異的標志物將可提高肝癌的早期診斷水平，進而達到早期治療提高療效目的。近來一些研究

2、表明GPC-3很可能是一個敏感的肝癌標志物和基因治療的靶基因，本研究對大量血清標本和組織進行檢測，明確HCC患者中GPC-3表達情況、及其表達水平和臨床參數(shù)之間的關(guān)系。同時通過檢測人肝癌及相應癌旁肝組織中GPC-3與IGF-Ⅱ基因在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達情況，進一步揭示HCC的發(fā)生發(fā)展機理。 方法 對大量血清標本進行ELISA檢測(肝癌患者血清60份、正常人14份、肝炎或肝硬化患者血清各13份)。用RT-PCR檢

3、測GPC-3與IGF-Ⅱ基因的mRNA和在70例人肝癌組織、癌旁肝組織和18例正常肝組織中的表達情況，以及與肝癌患者的血清AFP水平、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、臨床分期、有無術(shù)后復發(fā)、有無肝外轉(zhuǎn)移、有無門靜脈癌栓、病理分級等指標的關(guān)系。同時用免疫組織化學方法檢測GPC-3與IGF-II基因的蛋白在80例人肝癌組織、癌旁肝組織和8例正常肝組織中的表達情況，以及與肝癌患者的血清AFP水平、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、臨床分期、有無術(shù)后復發(fā)、有無肝外轉(zhuǎn)移、

4、有無門靜脈癌栓、病理分級等指標的關(guān)系。 結(jié)果 GPC-3血清中陽性臨界濃度定為60pg/ml時，GPC-3肝癌患者血清中的陽性率為：66.67％(40/60)；GPC-3在肝炎、肝硬化組血清中的陽性率為：15.38％(2/13)；在14例正常人血清中不表達。GPC-3在肝癌血清<'*>1．廣西留學歸國人員科學基金(桂科回0448020)資助項目2．廣西醫(yī)科大學研究生科研創(chuàng)新項目(309109)資助中的陽性率明顯高于在肝

5、炎、肝硬化組血清中的陽性率，兩者比較有顯著性差異性(P<0.05)。GPC-3在肝癌患者血清中的表達與臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、術(shù)后復發(fā)及血清AFP水平相關(guān)(P<0.05)，而與門靜脈癌栓、腫瘤個數(shù)、腫瘤大小、HBsAg及腫瘤分化程度無明顯關(guān)系(P>0.05)。在人肝癌血清中，GPC-3的陽性率(66.67％)與AFP的陽性率(66.67％)未見差異(P>0.05)。用RT-PCR檢測到70例HCC組織中GPC-3mRNA的陽性率為82.85

6、％(58/70)明顯高于癌旁組織的陽性率34.28％(24/70)(P<0.01)；58例HCC組織中GPC-3mRNA表達水平(0.596±0.205)明顯高于24例癌旁組織中表達水平(0.428±0.137)(P<0.05)；18例正常肝組織中未檢測到GPC-3的表達。70例HCC組織IGF-ⅡmRNA陽性率為92.86％(65/70)明顯高于癌旁組織的陽性率81.43％(60/70)(P<0.05)；65例陽性表達IGF-ⅡmRN

7、A的HCC組織中表達水平為(0.750±0.309)明顯高于在60例癌旁肝組織中的表達水平(0.648±0.237)(P<0.05)；18例正常肝組織IGF-Ⅱ基因的表達水平(0.495±0.192)。GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA在肝癌組織中的表達呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.281，P=0.038)，而兩者在癌旁肝組織的表達無相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)r=-0.165，P=0.500)。用免疫組化方法檢測GPC-3、IGF-Ⅱ在肝癌組

8、織中的陽性率分別為73.75％和76.25％，而在癌旁肝組織中的陽性率分別為53.75％和48.75％，差異有顯著性(P<0.05)；在癌組織中g(shù)lypican-3與IGF-Ⅱ的表達呈正相關(guān)。兩種方法檢測同時發(fā)現(xiàn)glypican-3基因和IGF-Ⅱ基因在人肝癌組織中的表達與臨床分期、腫瘤分化程度、肝外轉(zhuǎn)移及腫瘤大小相關(guān)(P<0.05)，而與門靜脈癌栓、腫瘤個數(shù)、血清AFP水平及術(shù)后復發(fā)無明顯關(guān)系(P>0.05)。 結(jié)論