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文檔簡介
1、目的:建立經(jīng)轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)處理后細胞的增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原表達均明顯增加的前列腺成纖維細胞(PrF)模型,以此為基礎(chǔ)研究丹參酮ⅡA對前列腺成纖維細胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原表達的影響,初步探明丹參酮ⅡA是否具有治療前列腺組織纖維化的潛力。
方法:通過酶反復(fù)消化法原代培養(yǎng)和差速貼壁法純化獲得 PrF,分別用5 ng/ml的TGF-β1和不同濃度的丹參酮ⅡA(25,2.5,0.25μg/ml)對其進行處理,噻唑藍(MT
2、T)比色法檢測細胞增殖活性,流式細胞儀檢測其對細胞周期的影響;半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原基因的表達,羥脯氨酸含量測定法檢測其對PrF分泌膠原蛋白的影響。
結(jié)果:5 ng/ml TGF-β1刺激PrF48h可觀察到細胞增殖最明顯(P<0.01),Ⅰ、Ⅲ型膠原基因的表達水平升高(P<0.01)以及細胞培養(yǎng)上清中膠原蛋白含量增多(P<0.01),因此采用5 ng/ml TGF-β1刺激48h可成功建
3、立體外PrF異常增殖的模型。25,2.5,0.25μg/ml3種濃度的丹參酮ⅡA作用48h后均能顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的細胞異常增殖(P<0.05或P<0.01),并且呈良好的量效關(guān)系。流式細胞儀觀察到不同濃度的丹參酮ⅡA將細胞阻滯在G1/G0期(P<0.05)。RT-PCR分析結(jié)果還顯示,最高濃度(25μg/ml)的丹參酮ⅡA對Ⅰ、Ⅲ型膠原基因的表達有顯著抑制作用(P<0.01)。PrF培養(yǎng)上清中羥脯氨酸含量的測定可以間接反映膠原蛋
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