1、　　目的：觀察清心安神方含藥血清對豚鼠離體心室肌細胞動作電位(AP)及大鼠離體心室肌細胞內向整流鉀電流(Ik1)的影響。
　　方法：(1)膜片鉗技術中的鈣耐受的心室肌細胞分離方法：經過Langendorff灌流系統(tǒng)的改進,酶濃度的合理選擇及配置,對溫度、速度、時間、壓力及pH值的嚴格控制,對分離心室肌細胞的進行梯濃度復鈣；(2)清心安神方空白血清及含藥血清的制備：清心安神經驗方協(xié)定比例,采用傳統(tǒng)方法煎煮,按人與大鼠的體表面積比

2、,以2~4ml/200(g·次),2次/d,連續(xù)3天,實際灌胃劑量為其等效劑量的5倍進行換算后,濃縮到2.25g生藥/毫升,末次給藥后1h,麻醉后腹主動脈取血,室溫下靜置1h,3000rp/min離心20min分離血清?？瞻籽褰M以等體積生理鹽水進行灌胃。含藥血清和空白血清均用56℃水浴鍋滅活30min,-20℃保存。(3)清心安神方含藥血清對豚鼠離體心室肌細胞動作電位的影響：使用Langendorff灌流系統(tǒng)離體主動脈逆行灌流豚鼠心臟

3、,聯(lián)合使用膠原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分離獲得單個心室肌細胞。采用全細胞膜片鉗技術電流鉗模式記錄動作電位,觀察含20%濃度的空白血清及含藥血清和含40%的空白血清及含藥血清的細胞外液灌流對AP的影響。(4)清心安神方含藥血清對大鼠心室肌細胞內向整流鉀通道的影響：使用Langendorff灌流系統(tǒng)離體主動脈逆行灌流大鼠心臟,聯(lián)合使用膠原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分離獲得單個心室肌細胞。采用全細胞膜片鉗技術電壓鉗模式記錄Ik1,觀察含

4、20%濃度的空白血清及含藥血清和含40%的空白血清及含藥血清的細胞外液灌流對Ik1電流的影響
　　結果：(1)清心安神方含藥血清對豚鼠心室肌細胞動作電位的影響：20%含藥血清組使動作電位復極至50%(APD50)和至90%(APD90)時動作電位時程延長(n=6 P<0.05)；40%含藥血清組使動作電位復極至 50%(APD50)和至 90%(APD90)時動作電位時程延長(n=7 P<0.01)；(2)清心安神方含藥血清對

5、大鼠心室肌細胞內向整流鉀電流的影響：以測試電壓-100mV 條件下的穩(wěn)態(tài)電流值作為觀察指標,清心安神方含藥血清對IKl內向電流成分影響為：20%含藥血清組從(-36.17±17.05)pA/pF抑制為(-24.80±13.94)pA/pF(n=6 P<0.05),40%含藥血清組從(-30.68±10.39)pA/pF抑制為(-21.03±3.47)pA/pF(n=7 P<0.05)。
　　結論：(1)20%及40%清心安神方