1、目的：建立宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤人臍靜脈內皮單層細胞的模型（以下簡稱宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型），探討MMP-9在宮頸鱗癌HCE1多細胞球體中的表達與宮頸癌浸潤的關系，并研究基質金屬蛋白酶抑制劑GM6001對宮頸癌HCE1多細胞球體浸潤人臍靜脈內皮細胞的影響。 方法： （一）、建立宮頸鱗癌HCE1多細胞球體的浸潤模型 1、運用液體重旋培養(yǎng)法培養(yǎng)宮頸鱗癌細胞株HCE1多細胞球體； 2、培養(yǎng)人

2、臍靜脈內皮單層細胞； 3、宮頸鱗癌HCE1多細胞球體和人臍靜脈內皮細胞共同培養(yǎng)：人臍靜脈內皮細胞70000/孔接種于48孔板，培養(yǎng)48個小時。HCE1多細胞球體重懸于完全培基，調整濃度為5-10個/ml，每個孔板里加1ml。置37℃，5％CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱共同培養(yǎng)7天。 （二）、免疫組化法檢測宮頸鱗癌HCE1單層細胞、宮頸鱗癌HCE1多細胞球體及人臍靜脈內皮細胞中MMP-9的表達 （三）、MMPs抑制劑GM

3、6001干預宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型 1、實驗分組：①對照組：同等濃度DMSO②GM60012.5uM組③GM600112.5uM組； 2、MMPs抑制劑GM6001對宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型的影響：宮頸鱗癌HCE1多細胞球體和人臍靜脈內皮細胞共同培養(yǎng)1h，加入干預藥物，并從實驗開始的第1天，每天更換培基1ml及同等濃度的干預藥物。光學顯微鏡下觀察第0、1、4、7天宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型的

4、浸潤情況，用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)軟件測量宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤范圍，分析GM6001的抑制作用； 3、免疫組化檢測宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型第4天各組MMP-9的表達。 結果： （一）、成功建立宮頸鱗癌HCE1多細胞球體的浸潤模型 1、宮頸鱗癌HCE1多細胞球體的培養(yǎng)：宮頸鱗癌HCE1細胞生長狀態(tài)良好，液體重旋法培養(yǎng)24小時可見細胞聚集成較小的松散聚集體，隨培養(yǎng)時間

5、的延長結構更加緊密，直徑逐漸增大。 2、人臍靜脈內皮細胞的培養(yǎng)：生長狀態(tài)良好，呈多邊形，相互緊貼，呈鋪路石狀。 3、宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型的建立：在共同培養(yǎng)1小時后，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體緊密粘附于人臍靜脈內皮細胞；隨著培養(yǎng)時間的延長，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體明顯解聚，迅速擴散浸潤人臍靜脈內皮細胞，內皮細胞退縮明顯。 （二）、免疫組化法檢測MMP-9的表達：宮頸鱗癌HCE1多細胞球體中MMP-9

6、高表達率明顯高于宮頸鱗癌HCE1單層細胞（p<0.05）。人臍靜脈內皮單層細胞MMP-9呈陰性表達。 （三）、MMPs抑制劑GM6001干預宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型： 1、GM60012.5uM組：與對照組比較，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體解聚能力減弱，浸潤范圍縮小，人臍靜脈內皮細胞退縮程度降低，至浸潤第7天，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體的浸潤能力抑制率達26.09％，與對照組相比差異有顯著性（p<0.05）。

7、 2、GM600112.5uM組：與對照組比較，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體未見明顯解聚，浸潤范圍明顯縮小，人臍靜脈內皮單層退縮不明顯，至浸潤第7天，宮頸鱗癌HCE1多細胞球體的浸潤能力抑制率達92.95％，與對照組相比差異有顯著性（p<0.05）。 3、宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤模型第4天對照組和試驗組中MMP-9的表達：GM60012.5uM組MMP-9高表達率較對照組降低（Pearson X2=2.133，P>0.0