1、N o ．2 0 0 3 3 1 3 5學(xué)校代碼 1 1 9 1 9中圖分類號河妒運(yùn)科六蠆碩塵研究生畢業(yè)論文《≥，人端粒酶催化亞單位( h T E R T ) 反義寡核苷酸對子宮內(nèi)膜癌i s h i k a w a 細(xì)胞生存能力影響研 究 生導(dǎo) 師專 業(yè)二 級 學(xué) 院研究起止日期提 交 日 期楊蓉娟賈金華教授婦產(chǎn)科學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院2 0 0 4 年9 月一2 0 0 6 年3 月2 0 0 6 年3 月中文摘要o l i g o d e

2、 o x y n u c l e o t i d e s ，A S O D N ) 轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株i s h i k a w a 細(xì)胞，觀察其對細(xì)胞的生長抑制作用及其機(jī)理，探討子宮內(nèi)膜癌基因治療的新方法。方法：1 寡核苷酸的設(shè)計(jì)合成 根據(jù)”E R T 基因’ m R N A 的序列分析，設(shè)計(jì)出互補(bǔ)于起始密碼子區(qū)的反義片：． 段，選擇起始密碼子上游6 個堿基及后續(xù)的l 4 個堿基，共一+ 2 0 個堿基長度為作用的靶序列的反義寡核苷

3、酸+ ( A S O D N )另外合成一段h T E R T 基因的正義寡核苷酸 ( S O D N ) 作為對照，每一條鏈均進(jìn)行全硫代修飾?！?i s h i k a w a 細(xì)胞系購于北大人民醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)。采用含1 O ％新生牛血清( 5 6 ℃滅活3 0 m i n 滅活) 、1 o O u ／m l 青霉素、1 O O u ／m 1 鏈霉素的I 沖M I ．1 6 4 0培養(yǎng)基，在3 7 ℃、5 ％C 0 2 飽和濕度條件下培

4、養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)選用‘對數(shù)生長期細(xì)胞設(shè)反義組、正義組、空白對照組。3 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)采用M T T 法測細(xì)胞增殖抑制情況。4 形態(tài)學(xué)觀察 倒置相差顯微鏡和G i e m u s a 染色法從形態(tài)學(xué)上觀察凋亡的情況。5 測定D N A L a d d e r 提取細(xì)胞D N A ，用1 ．5 ％瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步檢測發(fā)生凋亡的特征性D N A 降解。6流式細(xì)胞術(shù)分析采用流式細(xì)胞儀定量分析經(jīng)不同濃度作用的內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期特異性和蛋白B