1、目的：研究小鼠-大鼠異種異位心臟移植后供心miRNA表達譜的變化,為有效控制異種移植排斥反應奠定實驗基礎。
　　 方法：
　　 1.采用改良Heron套袖法建立小鼠-小鼠/大鼠異位心臟移植模型,將小鼠心臟移植到受體右側頸部。實驗動物包括同系對照組、異種24h組和異種停跳組,每組含受體動物8只。
　　 2.試劑盒法分離提取RNA,Cy5標記所提取總RNA中的miRNA,濃縮標記樣品進行miRNA芯片雜交,使用Axo

2、n GenePix4000B Microarray Scanner進行圖像掃描,篩選出異種心臟移植排斥反應中差異表達顯著的miRNA。
　　 3.TargetScan軟件預測差異表達顯著的miRNA靶基因,尋找與異種移植排斥反應發(fā)生相關的基因。
　　 4.選取雜交結果中差異表達顯著的miR-146a、miR-155和miR-451進行相對定量研究,通過TaqMan miRNA Assays技術對三組樣本進行檢測,驗證芯片

3、結果。
　　 結果：
　　 1.模型建立練習階段、穩(wěn)定階段和成熟階段手術成功率分別為53.33％、85.71％和92.31％,3個階段手術成功率相比較具有統(tǒng)計學差異且后兩階段成功率高于練習階段。
　　 2.異種24h組和對照組芯片雜交結果顯示24個miRNA差異表達顯著,其中11個表達顯著下調,13個表達顯著上調。
　　 3.異種停跳組和對照組芯片雜交結果顯示25個miRNA差異表達顯著,其中12個表達顯

4、著下調,13個表達顯著上調。
　　 4.異種停跳組和異種24h組芯片雜交結果顯示6個miRNA差異表達顯著,其中5個miRNA變化趨勢一致,1個miRNA變化趨勢相反。
　　 5.芯片雜交結果中差異表達顯著的miR-146a、miR-155和miR-451進行相對定量研究,與對照組相比較結果具有統(tǒng)計學差異,且3個miRNA的變化倍數符合芯片分析的結果。
　　 結論：
　　 1.采用改良Heron套袖法建立

5、小鼠-小鼠/大鼠異位心臟移植模型,此方法操作簡便、易于掌握,是研究異種心臟移植排斥反應的良好動物模型。
　　 2.在異種心臟移植排斥反應中出現多個miRNA顯著的差異表達,涉及免疫、腫瘤的發(fā)生、胰島素的合成與代謝、神經系統(tǒng)生理功能、細胞增殖、血管生成等多個方面,并廣泛參與基因的轉錄調控。
　　 3.在小鼠-大鼠異種心臟移植排斥反應中miR-146a和miR-155同時出現高表達,miR-451出現顯著低表達,說明它們參與