1、研究目的:成體心臟干細胞(CSCs)或心肌前體細胞(CMPCs)的發(fā)現(xiàn)，為心臟組織再生或修復治療注入了新的推動力。然而，由于成體心臟組織中CSCs/CMPCs的稀缺，以及沒有特異的表面標志，使其體外分離提取尤顯不易。更重要的是，臨床可獲取的心臟組織量少，從中可提取的干細胞將更為稀少，顯然無法滿足心臟組織再生的實際所需。所以，如何有效分離提取成體CSCs/CMPCs及其能否有效的體外擴增并保留穩(wěn)定的干細胞性能成為我們研究的重點。
　

2、　研究內(nèi)容和方法:首先，我們嘗試利用單克隆培養(yǎng)法或免疫磁珠細胞分選(MACS)結(jié)合抗小鼠Sca-1的磁珠抗體來分離或分選成體小鼠CSCs/CMPCs，并進行體外培養(yǎng)，對其表面抗原、基因表達等表型進行鑒定。然后鑒定其體外分化潛能，用不同的誘導體系來促使其向心肌細胞、平滑肌細胞或內(nèi)皮細胞分化。最后，在體外長期傳代擴增的基礎(chǔ)上，對早（P7代）、中（P28代）、晚（P53代）三代CSCs/CMPCs的干細胞表型和分化能力進行了對比分析，從而觀察

3、長期傳代是否對CSCs/CMPCs有影響。
　　研究結(jié)果:我們經(jīng)單克隆培養(yǎng)沒有得到克隆細胞，但經(jīng)MACS結(jié)合抗小鼠Sca-1磁珠抗體成功地分選到Sca-1+細胞，而且純度較高。這些Sca-1+細胞能在體外貼壁生長、增殖，以形體小、類圓及較強折光性為特征。經(jīng)我們分選得到的Sca-1+細胞基本不表達CD31抗原，屬于CD31-/Sca-1+亞型。其表型不同于造血干細胞、內(nèi)皮祖細胞，也不具成熟心肌細胞特征，但表達有多能干細胞和心臟前體細

4、胞的特征基因。體外誘導發(fā)現(xiàn)，5-氮雜胞苷沒能誘導出心肌特異蛋白的表達，但BMP-2/FGF-4的聯(lián)合作用使Sca-1+細胞能明顯表達心肌特異的基因或蛋白，但還不能形成具有自律性和收縮能力的成熟心肌細胞。在TGF-β1的誘導下，Sca-1+細胞能上調(diào)平滑肌特征基因或蛋白的表達。此外，在VEGF165的作用下，Sca-1+干細胞能夠明顯表達內(nèi)皮細胞特征基因或蛋白。這些成體心臟來源的Sca-1+細胞能在體外長期傳代培養(yǎng)，多達50代以上，并保持

5、著較為穩(wěn)定的干細胞表型和多向分化潛能，而且沒有發(fā)現(xiàn)致瘤性。
　　結(jié)論:經(jīng)鑒定，我們確定獲得的Sca-1+細胞為成體小鼠CSCs，屬于CD31-/Sca-1+亞群，可以在體外長期穩(wěn)定傳代，具有成心肌、平滑肌及內(nèi)皮樣細胞的多向分化潛能。MACS良好的分選效率為我們將來從人體心臟組織中提取自體CSCs提供寶貴的經(jīng)驗。通過長期傳代擴增獲得的大量Sca-1+ CSCs，為心臟組織工程的研究提供了充足的種子細胞，為我們研究心臟細胞的分化發(fā)育機