1、研究分為六部分：1.異亞丙基莽草酸對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖活性及NO、PGl<,2>分泌的影響.目的：研究異亞丙基莽草酸（3，4-oxo-isopropylidene-shikimic acid,ISA）對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖活性及NO、PGI<,2>分泌的影響.方法：用噻唑藍（MTT）比色法檢測細胞活性;硝酸還原酶法測定細胞培養(yǎng)液中NO

2、水平;放射免疫法測定細胞培養(yǎng)液中前列環(huán)素代謝物6-酮-前列腺素F<,1α>(6-keto-PGF<,1α>)含量.2.異亞丙基莽草酸對H<,2>O<,2>損傷血管內(nèi)皮細胞的保護作用.目的：以H<,2>O<,2>誘導HUVEC損傷，研究ISA對血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用.方法：倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變;MTT比色法檢測細胞活性;采用硝酸還原酶法測定細胞培養(yǎng)液中NO水平;放射免疫法測定細胞培養(yǎng)液中6-keto-PGF<,1α>含量;比

3、色法測定培養(yǎng)液及細胞裂解液的乳酸脫氫酶（LDH）活性并計算LDH的釋放率.結(jié)論：ISA對H<,2>O<,2>損傷血管內(nèi)皮細胞具有保護作用.3.異亞丙基莽草酸對H<,2>O<,2>誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的影響.目的：研究ISA對H<,2>O<,2>誘導HUVEC凋亡的影響并探討其機制.方法：用AnnexinV-PI染色流式細胞儀檢測法和原位未斷標記法（TUNEL）檢測細胞凋亡率;免疫細胞化學法檢測抗凋亡基因Bcl-2的表達.結(jié)論：ISA

4、對H<,2>O<,2>誘導HUVEC凋亡有明顯的抑制作用，其機理與上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2無關(guān).4.異亞丙基莽草酸的抗氧化作用研究.目的：研究ISA的體外抗氧化作用.方法：采用體外自由基捕捉實驗檢測ISA對超氧陰離子和羥自由基的清除率;采用硫代巴比妥酸微量法測定丙二醛;黃嘌呤氧化酶法測總超氧化物岐化酶（SOD）;可見光法測過氧化氫酶（CAT）.結(jié)論：ISA具有體外抗氧化作用，對抗氧化酶SOD和CAT的活性無直接影響.5.異亞丙基莽草酸

5、對H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細胞與中性粒細胞黏附及內(nèi)皮細胞黏附分子表達的影響.目的：觀察H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細胞與中性粒細胞（PMN）黏附的作用，H<,2>O<,2>對內(nèi)皮細胞黏附分子表達的影響及ISA的干預作用.方法：采用孟加拉玫紅染色法研究PMN與HUVEC黏附;cell-ELISA法研究HUVEC黏附分子的表達;RT-PCR法研究細胞間黏附分子-1（ICAM-1）的mRNA表達.結(jié)論：H<,2>O<,2>可誘導HUVEC

6、與PMN黏附，并增加ICAM-1的表達;ISA可抑制H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細胞與中性粒細胞黏附，其機制與抑制ICAM-1的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達有關(guān).6.異亞丙基莽草酸對白細胞與TNF-α誘導的內(nèi)皮細胞黏附的影響.目的：觀察ISA對白細胞與TNF-α誘導的HUVEC黏附的抑制作用并探討其作用機制.方法：孟加拉玫紅染色法研究PMN與HUVEC黏附;MTT比色法研究單核細胞與HUVEC的黏附;Cell-ELISA研究HUVEC黏附分子IC

7、AM-1、VCAM-1、E-選擇素的表達;RT-PCR法研究ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達，免疫細胞化學法檢測核轉(zhuǎn)錄因子-κB的核移位.結(jié)論：ISA抑制TNF-α誘導HUVEC與白細胞黏附，其作用機制與ISA抑制ICAM-1、E-選擇素和VCAM-1的表達有關(guān).綜上所述，異亞丙基莽草酸可促進HUVEC釋放前列環(huán)素;對H<,2>O<,2>引起的血管內(nèi)皮細胞損傷和凋亡具有保護作用.ISA可抑制內(nèi)皮細胞與白細胞的黏附，并抑制黏附分子