1、本研究立足于利用海藻糖合酶酶法合成海藻糖，研究?jī)?nèi)容包括產(chǎn)海藻糖合酶菌株的選育及其培養(yǎng)特性的研究，海藻糖合酶的提取和純化、酶學(xué)特性的研究，海藻糖的提取等。 通過(guò)高溫、高滲等條件從自然界篩選到一株產(chǎn)海藻糖合酶活性較高的菌株N0.62，并以其為出發(fā)菌株，通過(guò)物理和化學(xué)誘變方法，得到一株優(yōu)良的誘變株P(guān)-23-37作為本實(shí)驗(yàn)的生產(chǎn)菌株。并對(duì)其形態(tài)特征及生理、生化特性的研究。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)及響應(yīng)面法優(yōu)化確定了其產(chǎn)酶最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成及培養(yǎng)條

2、件，在此優(yōu)化條件下對(duì)菌株進(jìn)行培養(yǎng)，所得酶活力為48.82U/g濕菌體，比原始條件下的酶活力(36.75U/g濕菌體)提高了32.93％。 海藻糖合酶屬于胞內(nèi)酶，必須將細(xì)胞破碎使其釋放到發(fā)酵液中。本實(shí)驗(yàn)確定了脂溶法(甲苯破碎法)為破碎方法，得到最優(yōu)的破碎處理?xiàng)l件：甲苯濃度2％、破壁溫度35℃、料液比1:20和150r/min攪拌條件下反應(yīng)2.5h。粗酶液經(jīng)過(guò)Sephadex.G75和Sephadex-G200凝膠過(guò)濾柱，通過(guò)SDS

3、-PAGE電泳驗(yàn)證其純度，得到兩條亞基帶，并測(cè)定它們的分子量分別為55kDa和50kDa，并對(duì)其酶學(xué)特性進(jìn)行了研究。 以米氏方程為基礎(chǔ)，求得海藻糖合酶的固有參數(shù)米氏常數(shù)Km為8×10-4mol/L，最大反應(yīng)速度Vm為3.24x10-5mol/(L.S)。 本文還對(duì)實(shí)驗(yàn)所得的海藻糖粗液進(jìn)行了分離純化。將海藻糖粗液進(jìn)行酸解，使麥芽糖分解成單糖，海藻糖保留率達(dá)91.9％；而后采用活性炭柱分離，用去離子水和5％乙醇分級(jí)洗脫，可將