1、心房顫動（房顫）是臨床上最常見的持續(xù)性心律失常，其發(fā)病率隨著年齡的增加而逐步增加，能明顯增加患者病殘率和病死率。心臟機械活動和電活動的維持需要持續(xù)的能量代謝供能。房顫的能量代謝研究提示房顫發(fā)生發(fā)展過程中存在能量代謝的變化，且能量代謝的變化可以影響心房的收縮功能。
　　 蛋白質(zhì)組學技術能從整體的角度比較細胞在不同生理或病理條件下蛋白質(zhì)表達的異同，揭示蛋白質(zhì)功能與細胞生命活動規(guī)律。同重元素標記的相對和絕對定量(iTRAQ)技術是目前

2、最前沿的蛋白質(zhì)組學定量技術，能同時對最多8個樣品進行定量研究，精確性高、重復性強。
　　 目的：
　　 本研究項目擬采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學技術，輔助生物信息學的數(shù)據(jù)處理方法對處于竇性心律和慢性房顫時的風濕性心臟病患者的心耳組織中的蛋白質(zhì)組進行定性和定量的解析，得到竇性心律和慢性房顫時左、右心耳組織之間的能量代謝相關蛋白質(zhì)差異表達譜。分析能量代謝相關的差異表達蛋白質(zhì)及其在慢性房顫發(fā)生和維持中的作用，探討房顫發(fā)生的分子

3、機制和潛在的治療靶標。
　　 方法
　　 1.收集竇律和慢性房顫患者行二尖瓣置換術時的右心耳、左心耳組織標本，應用液氮研磨、裂解、超速離心獲得心耳組織總蛋白。
　　 2.通過Bradford法測定總蛋白質(zhì)濃度，行1D SDS-PAGE驗證裂解液對心耳組織全蛋白質(zhì)的提取效果并直觀的觀察所萃取的蛋白質(zhì)的分布特點。
　　 3.取四組樣品各l00μg蛋白質(zhì)進行胰蛋白酶酶解，分別進行不同的iTRAQ試劑標記，混合后

4、進行2維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測，重復分析鑒定兩次。
　　 4.應用ProteinPilot3.0軟件(ABI，USA)進行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的搜索，設定相關參數(shù)后得到正常竇律和慢性房顫時左、右心耳組織之間的蛋白質(zhì)差異表達譜。分析能量代謝相關的差異表達蛋白質(zhì)及其在慢性房顫發(fā)生和維持中的作用。
　　 5.應用Western blotting法來檢測竇性心律和慢性房顫時左右心耳之間細胞色素c氧化酶亞單位5B的表達變化，同時比較iTRA

5、Q標記的串聯(lián)質(zhì)譜重復檢測結果，以驗證基于iTRAQ技術的定量蛋白質(zhì)組學結果的可靠性。
　　 結果
　　 1.應用液氮研磨、裂解、超速離心等方法成功獲得心耳組織總蛋白，經(jīng)lD SDS-PAGE證實裂解液對心耳組織全蛋白質(zhì)的提取效果良好。
　　 2.對竇性心律和慢性房顫時的左右心耳組織成功的進行了iTRAQ標記聯(lián)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，總共得到792個非冗余蛋白質(zhì)。運用GeneCards人類基因數(shù)據(jù)庫鑒定出123

6、個與能量代謝有密切關系的差異表達蛋白質(zhì)，包括39個糖類代謝相關的差異表達蛋白質(zhì)、23個與脂類分解代謝相關的差異表達蛋白質(zhì)、49個參與生物氧化的差異表達蛋白質(zhì)以及12個其他能量相關差異表達蛋白質(zhì)。這些差異蛋白絕大部分是參與能量代謝反應的酶。比較得到的細胞能量代謝差異表達蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)不論在竇性心律或是慢性房顫時，左右心耳之間上述四類蛋白質(zhì)的表達都存在一些差異。將慢性房顫時左右心耳與竇性心律時左右心耳相比時，上述蛋白質(zhì)的表達差異更加明顯。

7、r>　　 3.竇性心律和慢性房顫時左心耳與右心耳相比，糖類、脂類及生物氧化能量代謝相關酶類和蛋白質(zhì)在數(shù)量和種類上均以下調(diào)趨勢為主，如電子傳遞黃素蛋白、細胞色素c氧化酶、ATP合酶、丙酮酸脫氫酶復合體、長鏈脂肪酸輔酶A連接酶、乙酰輔酶A酰基轉(zhuǎn)移酶等。而異戊酰基輔酶A脫氫酶等少數(shù)參與氨基酸分解代謝和醛類代謝的酶上調(diào)。
　　 4.慢性房顫時左右心耳與竇性心律時相比，大部分糖類、脂類及生物氧化能量代謝相關酶類和蛋白質(zhì)也出現(xiàn)下調(diào)，如電子

8、傳遞黃素蛋白、細胞色素c氧化酶、ATP合酶、果糖二磷酸醛縮酶和長鏈特異性?；o酶A脫氫酶等。除此之外，慢性房顫時左心耳比竇性心律時有更多的酶出現(xiàn)下調(diào)。而醛類代謝相關的酶仍是上調(diào)為主。
　　 5.應用Western blot法檢測竇性心律和慢性房顫時左右心耳之間細胞色素c氧化酶亞單位5B的結果與iTRAQ標記的串聯(lián)質(zhì)譜檢測結果基本一致，證實了基于iTRAQ技術的定量蛋白質(zhì)組學結果的可靠性。
　　 結論
　　 1.i