1、目的： 1.在培養(yǎng)基中加入氯化鈷（CoCl2）模擬化學缺氧培養(yǎng)細胞，以觀察低氧條件下缺氧誘導因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）在人乳腺癌細胞MDA-MB-231中的表達。 2.利用CoCl2建立的低氧模型，觀察鈣信號對乳腺癌細胞MDA-MB-231、MCF-7 HIF-1α表達及其侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法： 1.在培養(yǎng)基中加入CoCl2模擬化學缺氧，用MT

2、T法檢測CoCl2對乳腺癌細胞的抑制情況；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測CoCl2與HIF-1α的mRNA轉(zhuǎn)錄的量-效和時-效關(guān)系，從而為腫瘤細胞的缺氧模型選擇一個最佳的作用濃度和最佳的作用時間。 2.將實驗分成對照組、加CoCl2組、加CoCl2和鈣通道阻滯劑維拉帕米（verapamil，VPL）組，用RT-PCR方法檢測各組中HIF-1α的mRNA水平；蛋白印跡實驗（Western blotting）和免疫細胞

3、化學（Immunocytochemistry）檢測乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α蛋白的表達；Millicell小室人工重組基底膜侵襲遷移實驗檢測各實驗組中細胞侵襲遷移能力的改變。 結(jié)果： 1.150μmol/L CoCl2作用24h可作為最佳的乳腺癌細胞缺氧模型。 2.兩株細胞各實驗組都存在HIF-1α的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達，加CoCl2組HIF-1αmRNA水平和蛋白水平較對照組顯

4、著增高（P<0.01）；加VPL干預后，HIF-1αmRNA水平和蛋白水平都大大降低（P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231間有顯著差異（P<0.01）；兩株細胞的侵襲遷移能力VPL+ CoCl2組較CoCl2組明顯降低（P<0.05），MDA-MB-231更明顯（P<0.01）。 結(jié)論： 1.CoCl2可誘導乳腺癌細胞缺氧而使HIF-1α高表達。 2.阻斷鈣信號轉(zhuǎn)導途徑可以使HIF-1α的表達下調(diào)，進