1、轉(zhuǎn)移是影響惡性腫瘤患者預(yù)后的重要因素之一。淋巴轉(zhuǎn)移的識別和顯示技術(shù)成為腫瘤轉(zhuǎn)移的診斷、治療以及腫瘤.宿主免疫作用機制研究的一個窗口，通過阻斷或干預(yù)腫瘤新生淋巴管的細胞生長因子的表達，有望達到阻止腫瘤細胞淋巴轉(zhuǎn)移的目的。由微觀結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致的淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)和功能的相應(yīng)改變，也是影像學(xué)研究的熱點之一。由于惡性腫瘤本身沒有與身體正常循環(huán)系統(tǒng)直接聯(lián)系的通道，必須通過血管生成誘導(dǎo)鄰近血管向腫瘤發(fā)出新的血管即腫瘤新生血管才可以持續(xù)生長。因此，我們的研究假

2、設(shè)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移引起或產(chǎn)生淋巴結(jié)自身血管結(jié)構(gòu)的改變，通過經(jīng)靜脈超聲造影技術(shù)，希望能夠顯示這種淋巴結(jié)內(nèi)部的微血管改變，進而對淋巴結(jié)的功能和結(jié)構(gòu)狀況進行全面的評價，確定淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移。
　　 本實驗對兔后腿肌肉軟組織VX2腫瘤及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)進行SonoVue超聲造影顯像，研究腫瘤和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)微血管灌注模式，并與腫瘤和淋巴結(jié)新生血管分布的病理特點對照，分析超聲造影的血管灌注特點與微血管分布的關(guān)系，探討SonoVue超聲造影顯像對腫瘤及

3、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值。
　　 論文一：
　　 方法：
　　 成年的大耳白兔16只，體重2.0～2.8 kg。16只為實驗組，隨機分為4組，每組4只，每只兔雙側(cè)后腿肌肉內(nèi)種植VX2腫瘤組織懸液1ml。荷瘤兔(Tumorbearing rabbits)由中國醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)影像研究所惠贈，VX2腫瘤原系來自同濟醫(yī)科大學(xué)。種植腫瘤后第14d、21d、28d、35d進行普通超聲和造影超聲檢查。
　　 超聲檢查應(yīng)用德國

4、西門子Sequoia-512彩色多普勒超聲顯像儀，線陣探頭15L8Ws，頻率7～12MHz，配備專用小器官超聲造影軟件。采用Bracco公司聲諾維(SonoVue)超聲造影劑，造影微泡為磷脂包裹的六氟化硫。實驗兔肌肉注射速眠新(0.1～0.2ml/Kg體重)，麻醉后仰臥固定于實驗臺上，剪掉并剔除兔后腿內(nèi)側(cè)、胭窩、腹股溝區(qū)、下腹部的兔毛，以便超聲觀察。普通超聲檢查后選擇腫瘤最大切面，采用低機械指數(shù)相干脈沖系列成像(Coherent pul

5、se sequences，CPS)造影及組織優(yōu)化技術(shù)(tissue equalization technique，TEQ)，選擇FR200幀/秒，觸發(fā)時間AT=125ms。兔耳緣靜脈建立靜脈通路，彈丸式注入SonoVue造影劑稀釋液0.3ml，并迅速跟進生理鹽水5ml。記時并動態(tài)存儲超聲造影圖像。造影結(jié)束后回放造影增強過程，由3名超聲醫(yī)師對造影增強模式進行分析和描述，并應(yīng)用ACQ軟件進行時間一強度曲線分析，感興趣區(qū)的放置選擇腫瘤增強區(qū)。

6、避開鄰近較大血管。測定3次取平均值。測得腫瘤不同部位開始增強時間(Arrival Time，AT)、達峰時間(Time To Peak，TTP)、峰值強度(Peak Intensity，PI)。所有測量參數(shù)以(-x±s)表示。
　　 實驗結(jié)束空氣栓塞處死實驗兔，切除VX2腫瘤，標本放入中性福爾馬林溶液固定24小時后，石蠟包埋。進行常規(guī)HE染色和S-P免疫組化法檢測CD34染色陽性細胞，所有染色均進行抗原修復(fù)。CD34陽性細胞表現(xiàn)

7、為棕黃或棕褐色顆粒，表達于血管的內(nèi)皮細胞胞漿，以陽性著色的單個內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮細胞簇為陽性微血管。
　　 論文二：
　　 健康成年的大耳白兔24只，隨機分成兩組。實驗組16只，對照組8只。實驗組首先復(fù)制VX2腫瘤荷瘤兔模型，每只兔雙側(cè)后腿肌肉內(nèi)種植VX2腫瘤組織懸液1ml，種植腫瘤后分別于第3，4，5，6周超聲造影觀察兔胭窩及髂淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。對照組淋巴結(jié)反應(yīng)性增生模型兔采用兩側(cè)脅腹部皮下接種蛋黃懸液，第1周和2周后各注射

8、1次，第3周開始進行淋巴結(jié)造影。
　　 超聲檢查應(yīng)用德國西門子Sequoia-512彩色多普勒超聲顯像儀，15L8Ws線陣探頭，頻率7～12MHz，配備專用小器官超聲造影軟件。采用Bracco公司聲諾維(SonoVue)超聲造影劑，造影微泡為磷脂包裹的六氟化硫。實驗兔肌肉注射速眠新(0.1～0.2ml/Kg體重)，麻醉后仰臥固定于實驗臺上，剪掉并剔除兔后腿內(nèi)側(cè)、腘窩、腹股溝區(qū)、下腹部的兔毛，以便超聲觀察。普通超聲檢查后選擇腫瘤最

9、大切面，采用低機械指數(shù)CPS超聲造影及TEQ技術(shù)，選擇FR=200，觸發(fā)時間△T=125ms。兔耳緣靜脈建立靜脈通路，彈丸式注入SonoVue造影劑稀釋液0.3ml，并迅速跟進生理鹽水5ml。記時并動態(tài)存儲超聲造影圖像。造影結(jié)束后回放造影增強過程，由3名超聲醫(yī)師對造影增強模式進行分析和描述，并應(yīng)用ACQ軟件進行時間一強度曲線分析，感興趣區(qū)的放置選擇整個淋巴結(jié)，避開鄰近較大血管。測定3次取平均值。測得造影開始增強時間(Arrival Ti

10、me，AT)、達峰時間(TimeTo Peak，TTP)、峰值強度(Peak Intensity，PI)。所有測量參數(shù)以(-x±s)表示。
　　 實驗結(jié)束空氣栓塞處死實驗兔，切取造影觀察的淋巴結(jié)，沿淋巴結(jié)長軸剖開，中性福爾馬林溶液固定24小時后，石蠟包埋。常規(guī)HE染色。S-P免疫組化法檢測CD34染色陽性細胞，所有染色均進行抗原修復(fù)。
　　 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。實驗組和對照組造影增強時間曲線參數(shù)值用(-

11、x±s)表示。兩組淋巴結(jié)大小和兩組間造影參數(shù)的比較采用q檢驗；造影結(jié)果與淋巴結(jié)性質(zhì)的相關(guān)性比較采用Logistic回歸分析，p值<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 論文一：
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、VX2腫瘤種植后，4只實驗兔死亡，其余12只腫瘤種植成功，共38個瘤體，多發(fā)9只，單發(fā)3只。二維超聲表現(xiàn)為低回聲，壞死后內(nèi)部出現(xiàn)不規(guī)則無回聲。CDFI和CDE顯示腫瘤周邊型分布條狀或點狀血流信號。
　　 2

12、、超聲造影結(jié)果：腫瘤增強模式表現(xiàn)為從周邊開始增強向內(nèi)部不同程度增強，13～20秒腫瘤增強明顯，以后減弱，40秒左右排出。內(nèi)部壞死區(qū)無增強。ACQ曲線形態(tài)分析：腫瘤邊緣增強區(qū)緩慢增強，峰頂圓鈍，下降支平均持續(xù)40秒左右，緩慢排除造影劑；內(nèi)部無增強區(qū)與本底強度一致，呈平直線狀。
　　 3、病理結(jié)果顯示橫紋肌組織內(nèi)可見VX2腫瘤細胞呈巢狀或彌漫分布，瘤巢間含有大量不成熟的毛細血管和豐富的纖維組織。CD34免疫組化顯示陽性染色的內(nèi)皮細胞

13、位于VX2腫瘤細胞旁和纖維間質(zhì)內(nèi)。
　　 4、免疫組化結(jié)果與超聲造影增強模式對照：超聲造影顯示VX2腫瘤組織表現(xiàn)單一增強模式，動脈期快速灌注，一過性增強；腫瘤增強起于周邊部，內(nèi)部不能達到完全增強。CD34免疫組化結(jié)果顯示，種植于橫紋肌組織內(nèi)的腫瘤組織在鄰近血管處顯示新生血管存在；在腫瘤組織周圍可見新生血管分布，但不能形成正常管腔結(jié)構(gòu)，僅顯示為散在或聚集成簇的陽性染色區(qū)。腫瘤中央存在灶性壞死，該處未見CD34染色陽性細胞。腫瘤增強

14、模式與CD34染色陽性區(qū)的血管分布一致。
　　 論文二：
　　 1、實驗組兔死亡4只。實驗組發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)38個，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)共28個，占實驗組淋巴結(jié)總數(shù)的73.7％。每只兔均有1個或以上轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)；對照組淋巴結(jié)16個，病理均無轉(zhuǎn)移。
　　 2、實驗組和對照組淋巴結(jié)短徑在兩組間差別顯著(P<0.05)，普通超聲顯示轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)淋巴門不清晰或消失，淋巴結(jié)內(nèi)部回聲不均質(zhì)；髂淋巴結(jié)可顯示并有融合。對照組和未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)顯示胭窩淋

15、巴結(jié)可見淋巴門，未見淋巴結(jié)融合及髂淋巴結(jié)顯示。
　　 3、超聲造影顯示轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)表現(xiàn)為邊緣型增強或內(nèi)部不均勻增強，未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)全部表現(xiàn)為中央開始的彌漫均勻增強。良惡性淋巴結(jié)造影增強時間一強度曲線分析比較結(jié)果顯示，惡性組達峰時間(9.76±1.90秒)與良性組(15.44±3.71秒)，差異顯著(P<0.05)。超聲造影診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特異度72.7%，陽性預(yù)測值84.2%。與普通超聲結(jié)果比較(特異度57.1%，陽性預(yù)測值73.7

16、%)，特異度和陽性預(yù)測值增加。
　　 4、病理顯示轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)腫瘤細胞破壞淋巴結(jié)正常結(jié)構(gòu)，腫瘤轉(zhuǎn)移區(qū)CD34陽性血管內(nèi)皮細胞表達增多；腫瘤細胞侵犯的淋巴結(jié)內(nèi)部局灶性壞死區(qū)，未見CD34陽性染色血管內(nèi)皮細胞分布。反應(yīng)性增生淋巴結(jié)保持原有結(jié)構(gòu)和血管分布，CD34染色陽性細胞在反應(yīng)性增生淋巴結(jié)未見顯示。
　　 結(jié)論：
　　 1、SonoVue低機械指數(shù)超聲造影是一種敏感而安全的評價腫瘤血管生成的檢查方法，兔VX2軟組織腫