1、目的：化療作為惡性腫瘤三大常規(guī)治療方法之一，已成為惡性腫瘤治療不可替代的手段。盡管臨床上規(guī)范化治療的實(shí)施，但仍無法保證患者個(gè)體化化療的有效性，還存在過度化療、盲目化療等不合理的現(xiàn)象。如何真正達(dá)到個(gè)體化化療在臨床腫瘤治療中顯得尤為重要。腫瘤藥敏試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo)臨床個(gè)體化化療具有重要的意義。以往腫瘤藥敏試驗(yàn)對(duì)單個(gè)藥物的檢測較多，而對(duì)聯(lián)合方案的研究較少，如何進(jìn)一步提高腫瘤藥敏試驗(yàn)臨床相關(guān)性，增加化療療效、減少耐藥性和毒副作用變得越來越重要。而對(duì)化療

2、療效的評(píng)定除大體WHO通用評(píng)價(jià)方法之外，還有常規(guī)顯微鏡下觀察化療后病理形態(tài)學(xué)改變的組織學(xué)評(píng)定。對(duì)腫瘤組織病理形態(tài)學(xué)觀察的同時(shí)結(jié)合腫瘤標(biāo)志物檢測的對(duì)照研究綜合評(píng)價(jià)化療效果是一種新嘗試，我們?cè)槍?duì)新輔助化療對(duì)乳腺癌特異性基因(breastcancerspecificgene，BCSGl)的影響進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)BCSGl表達(dá)從蛋白質(zhì)水平和mRNA水平上均受到化療的影響而下降，可作為評(píng)價(jià)乳腺癌患者化療效果的指標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，本研究擬探究臨床常規(guī)

3、檢測的乳腺癌預(yù)后指標(biāo)對(duì)不同化療方案的反應(yīng)，進(jìn)而探討其是否能在預(yù)測預(yù)后的同時(shí)指導(dǎo)化療方案的選擇。 VEGF、Bcl-2和PCNA在判斷預(yù)后方面的作用已較為肯定，而它們?cè)谠u(píng)價(jià)化療效果方面的作用少有人系統(tǒng)研究。有鑒于此，本研究將通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)首先從大體上觀察不同化療方案對(duì)MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠飲食、活動(dòng)、體重和腫瘤重量變化的影響，綜合分析不同化療方案對(duì)乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影響因素；在此基礎(chǔ)上，采用HE染色、免疫組織化學(xué)方

4、法和流式細(xì)胞檢測技術(shù)結(jié)合移植瘤組織病理形態(tài)學(xué)，探討VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白對(duì)乳腺癌不同化療方案效果評(píng)價(jià)的指導(dǎo)意義和應(yīng)用價(jià)值。最終探討新輔助化療(術(shù)前化療)與乳腺癌預(yù)后指標(biāo)間的關(guān)系，為指導(dǎo)臨床化療方案的選擇，推行個(gè)體化治療尋找新的依據(jù)和思路。 方法：1建立模型和實(shí)驗(yàn)分組：將88只接種乳腺癌MCF-7瘤株并成瘤的裸鼠隨機(jī)分為10個(gè)化療組和1個(gè)對(duì)照組，每組8只裸鼠。其中5個(gè)化療組按1/3LD10劑量，另5個(gè)化療組按2/3LD

5、10劑量分別給予化療方案(CMF、CAF、NP、TP、Xeloda)干預(yù)；對(duì)照組給予生理鹽水，模擬臨床順序腹腔內(nèi)或口服給藥。2觀察指標(biāo)及抑瘤作用評(píng)價(jià)：每日定時(shí)觀察記錄荷瘤裸鼠的飲食、活動(dòng)和體重情況，并測量記錄移植瘤的生長情況，計(jì)算抑瘤率，分析在不同劑量強(qiáng)度下各化療方案對(duì)MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影響因素，選擇最適宜的劑量強(qiáng)度組進(jìn)行后期研究。采用HE染色，常規(guī)光學(xué)顯微鏡下觀察移植瘤組織化療后病理形態(tài)學(xué)變化，并進(jìn)行病理組織學(xué)

6、化療療效分級(jí)評(píng)價(jià)。3免疫組化法和流式細(xì)胞術(shù)檢測：采用免疫組化SP法和流式細(xì)胞術(shù)檢測乳腺癌移植瘤組織VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白的表達(dá)情況，對(duì)比分析化療組與對(duì)照組之間差異。4相關(guān)分析：分析乳腺癌移植瘤組織VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白表達(dá)與病理組織化療療效分級(jí)的關(guān)系。5統(tǒng)計(jì)分析：采用spss統(tǒng)計(jì)軟件(10.0版)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。各項(xiàng)參數(shù)值之間用x2檢驗(yàn)、spearman等級(jí)相關(guān)分析。 結(jié)果：

7、1荷瘤裸鼠體重，瘤重和抑瘤率：2/3LD10劑量各化療組裸鼠體重明顯低于對(duì)照組，均有顯著性差異(P＜0.05)；各化療組瘤重明顯低于對(duì)照組，均有顯著性差異(P＜0.05)；抑瘤率分別為83.1％、75.5％、84.6％、87.9％、91.0％。1/3LD10劑量各化療組裸鼠體重均低于對(duì)照組體重，均有顯著性差異(P＜0.05)；各化療組瘤重低于對(duì)照組，但僅有CMF組與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)，抑瘤率分別為36.7％、18.0％、

8、20.5％、19.5％、18.0％。結(jié)果顯示2/3LD10劑量化療組可較準(zhǔn)確反應(yīng)化療藥物的聯(lián)合作用和對(duì)裸鼠的影響，臨床相關(guān)性較好，故選擇2/3LD10劑量化療組進(jìn)入下面的研究。2免疫組化檢測結(jié)果：各化療組VEGF陽性標(biāo)記指數(shù)(1abelingindex，LI)均顯著低于對(duì)照組，均有顯著性差異(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著低于CMF和CAF組(P＜0.05)；NP組顯著低于CAF組(P＜0.05)。各化療組Bcl-2蛋白LI

9、值均高于對(duì)照組，CAF、NP、TP和Xeloda與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)。兩兩比較，TP組較CMF、CAF組顯著增高(P＜0.05)。各化療組PCNA蛋白LI值明顯低于對(duì)照組，均有顯著性差異(P＜0.05)，且NP組顯著低于CMF、CAF、TP和Xeloda組(P＜0.05)，TP、Xeloda組顯著低于CMF、CAF組(P＜0.05)。3流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果：各化療組VEGF表達(dá)熒光指數(shù)(Fluorescenceindex，

10、FI)值與對(duì)照組比較均顯著下降，有顯著性差異(P＜0.05)，且NP、TP和Xeloda組顯著低于CAF和CMF組(P＜0.05)，Xeloda組顯著低于NP組(P＜0.05)。各化療組Bcl-2表達(dá)FI值與對(duì)照組比較顯著升高，均有顯著性差異(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著高于CMF、CAF和NP方案(P＜0.05)。各化療組PCNA表達(dá)FI值較對(duì)照組顯著下降(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著低于CMF、CAF組(

11、P＜0.05)，NP組顯著低于CMF組(P＜0.05)。4VEGF、Bcl-2和PCNA表達(dá)與病理學(xué)化療療效分級(jí)的關(guān)系：VEGF蛋白表達(dá)在三個(gè)療效分級(jí)間有顯著性差異(x2=33.216，P＜0.05)；呈顯著正相關(guān)(r=0.650，P＜0.05)。Bcl-2蛋白表達(dá)在三個(gè)療效分級(jí)間有顯著性差異(x2=12.542，P＜0.05)；呈負(fù)相關(guān)趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.306，P＞0.05)。PCNA蛋白表達(dá)在三個(gè)療效分級(jí)間有顯著性差異

12、(x2=12.061，P＜0.05)；呈顯著正相關(guān)(r=0.540，P＜0.05)。 結(jié)論：1針對(duì)乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠的體內(nèi)藥敏試驗(yàn)，選用2/3LD10劑量進(jìn)行聯(lián)合化療方案藥敏試驗(yàn)可較準(zhǔn)確地反映化療藥物的聯(lián)合作用和對(duì)機(jī)體的影響，臨床相關(guān)性較好。 2不同化療方案均可降低裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤組織VEGF和PCNA蛋白表達(dá)，并增強(qiáng)Bcl-2蛋白表達(dá)。其中TP和Xeloda兩個(gè)方案對(duì)三者表達(dá)的影響顯著，而NP僅對(duì)VEG