1、卵巢癌是全世界范圍內(nèi)女性生殖系統(tǒng)腫瘤中死亡率最高的惡性腫瘤。早期臨床癥狀的不明顯和腫瘤特異性標記物的缺乏，使卵巢癌的早期診斷愈發(fā)困難。由于卵巢癌具有腹腔侵襲和種植的特點，使得卵巢癌患者不能得到徹底的根治。卵巢癌的常規(guī)治療(包括腫瘤細胞減滅術(shù)和化療藥物治療)雖然能去除癌癥腫物，卻忽視了治療后那些能夠存活下來的對化療耐藥的卵巢癌腫瘤干細胞(cancer stem cell，CSC)。CSC是存在于腫瘤組織中的具有自我更新和分化為異質(zhì)性腫瘤群

2、的一群細胞，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。近來，關(guān)于卵巢癌CSC和腫瘤干細胞樣細胞(cancer stem cell-like cells，CSC-LCs)的成功分離和鑒定已有報道。進一步研究發(fā)現(xiàn)，細胞表面的CD44分子在人類卵巢癌CSC中的表達上調(diào)。大量有力證據(jù)表明，CD44分子與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。如果用抗CD44的單克隆抗體去封閉CSC表面的CD44分子，勢必會對卵巢癌CSC的生長產(chǎn)生一定程度的影響。這些研究

3、將為特異性錨定CSC的新型腫瘤靶向治療策略提供一些新思路。
　　為了給卵巢癌靶向治療策略及其它相關(guān)的臨床藥物的研發(fā)提供實驗依據(jù)，本研究旨在揭示A3D8(一種抗CD44的單克隆抗體)對三種人卵巢癌CSC-LCs的細胞增殖、凋亡、致瘤性等生物學行為的影響作用及其分子機制。在我們的前期實驗中，利用“無血清特殊生長培養(yǎng)基”(以DMEM/F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基并添加多種因子)并采用“懸浮球培養(yǎng)法”分別從三種不同來源的樣本(人卵巢癌細胞系SKOV

4、-3；上皮性卵巢癌患者實體瘤組織；上皮性卵巢癌患者的腹水)中分選并鑒定出三種人卵巢癌CSC-LCs(S-CSC-LCs，T-CSC-LCs和A-CSC-LCs)。為全面探討A3D8對人卵巢癌CSC-LCs的影響和機制，分別進行了以下體外和體內(nèi)檢測實驗：細胞增殖MTS實驗，軟瓊脂培養(yǎng)實驗，細胞周期分析實驗，AO/EB雙重熒光染色、普通Giemsa染色及放大性Giemsa染色的顯微鏡檢，Annexin V-FITC/PI雙染的細胞凋亡流式檢

5、測，Rhodamine123染色的細胞線粒體跨膜電位(△ψM)流式檢測，實時熒光定量RT-PCR，免疫印跡檢測及動物體內(nèi)實驗。細胞表面分子CD44被A3D8封閉后，細胞增殖明顯減弱；細胞的克隆集落形成能力被降低；G0/G1期細胞比例明顯減少的同時S期的比例增加；細胞周期進程發(fā)生S期阻滯；細胞凋亡被顯著增強，鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)微核和典型的凋亡形態(tài)學改變。A3D8抑制增殖和誘導凋亡的作用呈現(xiàn)劑量依賴性和時間依賴性。A3D8與DDP(一種卵巢癌

6、鉑類化療藥物)的聯(lián)合使用可提高DDP抑制增殖和誘導凋亡的毒性作用。我們還發(fā)現(xiàn)A3D8作用后的CSC-LCs中的p21和caspase-3分子在mRNA和蛋白水平的表達增強，同時CDK2、cyclinA和bc1-2分子的表達降低。由此推論，A3D8在封閉細胞表面分子CD44后，可上調(diào)人卵巢癌CSC-LCs的細胞周期調(diào)控分子p21，它負向調(diào)控CDK2活性，減少CDK2/cyclinA復合物的形成，通過這種信號調(diào)節(jié)使細胞周期進程發(fā)生S期阻滯，

7、從而明顯抑制細胞增殖；而A3D8誘導凋亡的作用則是通過改變細胞線粒體的△ψM和下調(diào)抑制凋亡蛋白bc1-2的表達等機制來完成的。結(jié)果還顯示，A3D8可明顯降低人卵巢癌CSC-LCs在NOD/SCID小鼠體內(nèi)的致瘤性。
　　研究結(jié)果支持抗CD44單克隆抗體A3D8被應(yīng)用于新型的單克隆抗體腫瘤治療，在卵巢癌術(shù)后用單抗靶向卵巢癌CSC，抑制其增殖、誘導其凋亡，從而減少原位腫瘤復發(fā)和腹腔轉(zhuǎn)移；臨床化療用A3D8與DDP聯(lián)合使用可增強化療藥物