1、背景：
　　 在我國,糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是終末期腎病(end stage renaldisease,ESRD)的第二大原因。其發(fā)病機制復雜,至今未得到全面的認識,也沒有有效的治療方法。鈣神經蛋白(calcineurin,CaN)是一種鈣離子敏感的蛋白磷酸激酶,能調節(jié)足細胞骨架蛋白synatopodin的穩(wěn)定性。內質網(wǎng)應激是指細胞內質網(wǎng)未折疊或錯誤折疊蛋白堆積時引起的細胞應激反應。近來有研

2、究提示在內質網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress,ERS)時CaN活性增加。糖尿病(diabetes mellitus,DM)狀態(tài)下體內棕櫚酸鹽升高,體外細胞試驗證明棕櫚酸鹽能引起ERS。熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)是內質網(wǎng)應激的化學分子伴侶,體外大鼠肝細胞及糖尿病模型小鼠實驗都證明UDCA能降低ERS感應蛋白PKR類似的內質網(wǎng)激酶(PKR-like ER kinase,P

3、ERK)和肌醇依賴酶1α(Inositol-rcquiring enzyme1α,IRE-α)的磷酸化,抑制ERS依賴的JNK凋亡途徑,緩解ERS引起的損傷。足細胞是維持腎小球濾過屏障的主要成分,足細胞數(shù)量減少、足突消失是DN損傷時引起蛋白尿的重要原因。我們的前期工作發(fā)現(xiàn)早期DN中存在足細胞ERS,但ERS對足細胞CaN的調控尚無報道。進一步深入研究足細胞ERS對CaN的影響對糖尿病腎病甚至蛋白尿患者臨床上是否以及怎樣合理選擇使用鈣神經

4、蛋白抑制劑(calcineurin inhibitor,CNI)具有指導意義,同時,也有助于進一步明晰CaN在蛋白尿發(fā)病機制中的作用。
　　 目的：
　　 以體內、外試驗方法,探討糖尿病腎病狀態(tài)下,足細胞內質網(wǎng)應激時鈣神經蛋白的變化。
　　 方法
　　 以C57BLKS/JLepr db/db早期糖尿病腎病模型小鼠為研究對象,以db/m小鼠為對照,分6周齡、9周齡和12周齡3組,使用激光共聚焦法檢測腎小球

5、足細胞CaN的變化特點。另以棕櫚酸鹽或聯(lián)用UDCA為刺激物,作用于永生小鼠足細胞系,觀察其對足細胞CaN表達的影響。使用Real-Time PCR的方法觀察不同棕櫚酸鹽濃度刺激下足細胞CaN mRNA水平的變化；使用激光共聚焦法和western blotting方法在蛋白水平檢測棕櫚酸鹽或聯(lián)用UDCA后足細胞CaN的變化；western blotting方法同時觀察足細胞骨架蛋白synpatopodin的變化。
　　 結果

6、>　　 (1)db/db糖尿病腎病模型小鼠腎小球足細胞CaN的表達隨尿蛋白量的增加而升高,分布與synatopodin相似,足細胞synaptopodin的表達隨蛋白量的增加而降低。
　　 (2)體外小鼠足細胞CaN的mRNA水平隨棕櫚酸鹽刺激濃度由250μM增加到500μM而明顯增加,高低濃度表達的差異具有統(tǒng)計學意義,p<0.05；激光共聚焦檢測棕櫚酸鹽作用下足細胞CaN的表達上調,而加用UDCA后CaN的表達下降,p<0.