1、目的:觀察不同濃度的靈芪蠲肝膠囊含藥血清對血小板衍化生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)誘導的大鼠肝星狀細胞-T6(hepaticstellate cell-T6,HSC-T6)增殖和兩面神激酶-2(janus kinase-2,JAK-2)、信號傳遞與轉(zhuǎn)錄激活因子-3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT-3)、組織

2、金屬蛋白酶抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白量表達的影響,探討其可能的抗肝纖維化機制。
　　 方法:1.制備含藥血清:SD大鼠25只,隨機分為5組,每組5只,分別用生理鹽水(A組,10ml／kg)、復方鱉甲軟肝片藥液(B組,1.5g／kg)、靈芪蠲肝膠囊藥液小劑量(C1組,2.125g／kg)、中劑量(C2組,4.25g／kg)、大劑量(C3組,8.5g

3、／kg)灌胃7天,經(jīng)腹主動脈采血,靜置、離心、滅活、過濾,取得含藥血清。2.將各組含藥血清按200ml／L分別作用于10ng／ml PDGF刺激的HSC-T6,24、48、72h后用CCK-8法測定各組HSC-T6的吸光度值并繪制生長曲線,透射電鏡觀察各組細胞超微結(jié)構(gòu)的變化,免疫印跡法檢測24h時各組細胞中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白量的表達。3.統(tǒng)計學處理:計量資料以均數(shù)±標準差((x)±s)表示,各組間比較用單因素方差

4、分析,多樣本均數(shù)兩兩比較用SNK-q檢驗,應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。檢驗水準:雙側(cè)α=0.05,P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:1.對HSC-T6增殖的影響:共培養(yǎng)24h時,與A組比較,B、C2、C3各組藥物血清均可明顯抑制HSC-T6的增殖,有顯著統(tǒng)計學差異(均P<0.01)；C1組無抑制作用(P>0.05)；B、C3組較C2組抑制明顯,有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)；B、C3組間抑制無統(tǒng)計學差異

5、(P>0.05)。48h時,與A組比較,B、C1、C2、C3各組藥物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)；B、C3組較C1、C2組抑制明顯,有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)；B、C3組間抑制無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；C1、C2組間抑制無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；72h時,與A組比較,B、C1、C2、C3各組藥物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)；但B、C1、C2、C3組各組間抑制

6、均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。C1、C2、C3各組藥物血清在各時間點對HSC-T6的抑制作用隨血清中藥物濃度增加呈逐漸增強趨勢。2.透射電鏡下HSC-T6超微結(jié)構(gòu)的改變:共培養(yǎng)24h后,A組細胞的細胞核形態(tài)正常,核膜結(jié)構(gòu)清晰,染色質(zhì)分布正常,細胞器豐富,可見大脂滴。B、C1、C2、C3組可見大量不同程度的壞死和凋亡細胞,其細胞體積變小,核膜消失,胞質(zhì)內(nèi)空泡增多,細胞器較少,細胞核染色質(zhì)固縮,形態(tài)不規(guī)則,可見核碎裂。同一時間點,上述改變

7、在B、C3組最明顯,C2組次之,C1組最輕；且培養(yǎng)時間越長,改變越顯著。3.共培養(yǎng)24h時JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表達量的變化:免疫印跡法顯示,與A組相比,B、C1、C2、C3組大鼠HSC-T6中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白表達量均明顯減少(均p<0.01)；C1組JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表達量均較B組高,有顯著統(tǒng)計學差異(均P<0.01)；C2組JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋

8、白表達量均較B組低,但無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)；C3組JAK-2、TIMP-1蛋白表達量較B、C2組均降低,有顯著統(tǒng)計學差異(均P<0.01),STAT-3蛋白表達量較B、C2組降低,但無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)。
　　 結(jié)論:1.靈芪蠲肝膠囊可以抑制PDGF誘導的HSC-T6增殖,且作用具有劑量依賴性；2.靈芪蠲肝膠囊能降低JAK-2、STAT-3在活化的HSC-T6中的表達,從而阻斷JAK／STAT信號通路的傳導,