1、隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃(HGP)完成，明確人類(lèi)30億個(gè)堿基對(duì)中包含了30000-40000個(gè)功能基因，這些基因的功能和轉(zhuǎn)錄調(diào)控多數(shù)尚不清楚。深入研究基因的結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、功能和相互關(guān)系成為后基因組時(shí)代生命科學(xué)的主要任務(wù)。
　　EOLA1(endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor1)基因是我們實(shí)驗(yàn)室在2002年通過(guò)抑制消減雜交(SSH)和cDNA末端擴(kuò)增

2、技術(shù)(RACE)從脂多糖(LPS)刺激后的ECV304細(xì)胞中克隆到的一段全長(zhǎng)cDNA序列，命名為內(nèi)皮高表達(dá)脂多糖相關(guān)因子1，作為人類(lèi)新基因被GenBank全長(zhǎng)序列庫(kù)所接收(No.AY074889)。目前,我們已完成對(duì)該基因的結(jié)構(gòu)及特性的基本研究，發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)錄序列全長(zhǎng)為1404個(gè)bp，定位于人染色體Xq28，跨越了6794bp的基因組序列，被4個(gè)內(nèi)含子分割為5個(gè)外顯子，在5′側(cè)翼區(qū)-734bp～-666bp存在核心啟動(dòng)子，但無(wú)典型TATA盒

3、，其轉(zhuǎn)錄受到Sp1和Myf轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，編碼蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)由158個(gè)氨基酸組成，二級(jí)結(jié)構(gòu)含α螺旋、β片層結(jié)構(gòu)和β轉(zhuǎn)角，并形成一個(gè)螺旋－轉(zhuǎn)角－螺旋(HTH)基序，其氨基酸序列包含2個(gè)PKC磷酸化位點(diǎn)、1個(gè)酪氨酸激酶2磷酸化位點(diǎn)和1個(gè)氨基端糖基化位點(diǎn)，C-端含活化信號(hào)共整合子1類(lèi)似物（activating signal cointegrator-1 homology，ASCH）功能域，因此，EOLA1屬ASCH超家族成員，分子量17.89k

4、Da，等電點(diǎn)6.43，親水性好，為可溶性蛋白。ASCH超家族遍布于各種生命體中，結(jié)構(gòu)上形成一個(gè)小β管狀結(jié)構(gòu)域，類(lèi)似于PUA功能域，也能與RNA結(jié)合，推測(cè)在共激活、RNA加工和原核翻譯調(diào)控中發(fā)揮作用，介導(dǎo)了多種轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用和基本轉(zhuǎn)錄機(jī)制的進(jìn)行。
　　Nortern blot顯示EOLA1基因在正常成人血管豐富的組織高表達(dá)，另外，在癌細(xì)胞株中EOLA1也有選擇性表達(dá)。迄今為止對(duì)EOLA1基因功能尚不清楚，但我們前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)

5、EOLA1蛋白能與金屬硫蛋白2A（MT2A）相互作用，高表達(dá)EOLA1促進(jìn)ECV304細(xì)胞增殖，抑制其表達(dá)后細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減慢，且肝移植炎癥反應(yīng)更加明顯。我們通過(guò)原核表達(dá)和家兔免疫已經(jīng)制備抗EOLA1多克隆抗體，擬在本課題中觀察EOLA1蛋白的亞細(xì)胞定位和腫瘤組織表達(dá)，以對(duì)EOLA1基因功能有更深入的了解。
　　為了完成亞細(xì)胞定位，我們構(gòu)建了EOLA1-EGFP共表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染ECV304細(xì)胞，瞬時(shí)表達(dá)后在激光共聚焦顯微鏡及免疫電鏡

6、下觀察綠色熒光定位。另外，我們采用免疫組化的方法檢測(cè)EOLA1蛋白在人體食道癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤和乳腺癌組織的表達(dá)。
　　在激光共聚焦顯微鏡下觀察到細(xì)胞漿及細(xì)胞核均有強(qiáng)綠色熒光信號(hào)，經(jīng)DAPI染色證實(shí)EGFP-EOLA1融合蛋白呈全細(xì)胞表達(dá)，有細(xì)胞核聚集現(xiàn)象。酶標(biāo)免疫電鏡也觀察到EOLA1蛋白在細(xì)胞漿的基質(zhì)中表達(dá)。EOLA1蛋白在檢測(cè)的食道癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤和乳腺癌間質(zhì)細(xì)胞胞漿中都有表達(dá)，而在