1、第一部分：
　　 目的:觀察兒科重癥監(jiān)護(hù)病房(Pediatric intensive care unit,PICU)機(jī)械通氣(mechanical ventilation,MV)患兒氣管導(dǎo)管(endotracheal tube,ETT)內(nèi)壁細(xì)菌生物膜(biofilm,BF)內(nèi)細(xì)菌分布情況及BF形態(tài)學(xué)特征。
　　 方法:以我院治療的35例MV患兒為研究對象。收集第一次拔除的ETT,經(jīng)碘化丙啶(PI)和異硫氰酸熒光素標(biāo)記刀豆

2、蛋白A(FITC-ConA)染色后,激光共聚焦顯微鏡(Confocal Laser Canning Microscopy,CLSM)觀察ETT-BF內(nèi)細(xì)菌及胞外多糖(extracellular polymericsubstances,EPS)分布情況,并收集ETT和下呼吸道分泌物進(jìn)行細(xì)菌分離、培養(yǎng)和鑒定。
　　 結(jié)果:(1)35例MV患兒中,ETT表面培養(yǎng)陽性31例(88.57％)；17例ETT表面和下呼吸道分泌物同時(shí)分離出相同

3、菌種,占ETT培養(yǎng)陽性的54.83％。在ETT-BF和下呼吸道分泌物中以金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌最常見。
　　 (2)CLSM觀察可見,氣管插管12h后,ETT表面己出現(xiàn)細(xì)菌粘附；48h時(shí)ETT表面可見大量短棒狀或球狀細(xì)菌粘附聚集,EPS較12h時(shí)顯著增多,初步形成BF結(jié)構(gòu)；72h左右細(xì)菌粘連成團(tuán)塊狀,被EPS包裹,可見成熟BF結(jié)構(gòu)形成；7天后細(xì)菌粘連成大片狀,在其周圍可見散在的微菌落。
　　

4、 (3)35例MV患兒中,19例發(fā)生了呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎(Ventilated-associated Pneumonia,VAP),其中經(jīng)口插管10例(62.5％),經(jīng)鼻插管9例(100％),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:MV時(shí)細(xì)菌極易在ETT表面粘附,形成細(xì)菌BF。ETT內(nèi)壁細(xì)菌定植及BF形成與長時(shí)間MV患兒伴發(fā)呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎之間可能存在一定相關(guān)性。
　　 第二部分：
　　 目的:探討氣囊導(dǎo)

5、尿管機(jī)械清理法對機(jī)械通氣(mechanicalventilation,MV)患兒氣管導(dǎo)管(endotracheal tube,ETT)內(nèi)壁細(xì)菌生物膜(biofilm,BF),形成的干預(yù)作用。
　　 方法:采用前瞻性、隨機(jī)、對照設(shè)計(jì),將MV患兒90例按體外循環(huán)下行先天性心臟病直視手術(shù)(體外循環(huán)組)和肺炎兩病種隨機(jī)分為氣囊導(dǎo)尿管機(jī)械清理組(每天3次為A組、每天2次為B組)和對照組(C組)。平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)算ETT-BF細(xì)菌菌落數(shù)；P

6、I/FITC-ConA染色后,CLSM觀察ETT-BF結(jié)構(gòu)以及生物膜厚度的變化；比較3組ETT和下呼吸道分泌物細(xì)菌菌種的變化及入住ICU時(shí)間、MV時(shí)間、呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎(Ventilator-associated Pneumonia,VAP)發(fā)生情況。
　　 結(jié)果:(1)菌落計(jì)數(shù):①體外循環(huán)組:A組ETT-BF細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)較C組顯著減少(P<0.05),B和C組ETT-BF細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)在MV0～2d時(shí)差異不顯著,但隨著MV時(shí)間延

7、長,其菌落計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；②肺炎組:A、B組ETT-BF細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)較C組顯著減少(P<0.05)。
　　 (2)細(xì)菌培養(yǎng)陽性率:①體外循環(huán)組和肺炎組中A、B組下呼吸道分泌物培養(yǎng)陽性率較C組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且下呼吸道分泌物菌種主要以正常菌群為主；②體外循環(huán)組和肺炎組中A、B組ETT培養(yǎng)陽性率較C組降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (3)CLSM觀察,C組可

8、見發(fā)出綠色熒光的云霧狀的EPS將紅色的細(xì)菌包裹,形成具有一定厚度的成熟的BF,A組僅見零散分布染成紅色的細(xì)菌,未見BF形成；B組細(xì)菌數(shù)量較A組多,可見少量的綠色熒光。BF厚度:體外循環(huán)組C組中1d,3d,7d亞組分別為26.73±3.52pan,37.43±4.86μm,43.51±2.30μm,BF厚度隨MV時(shí)間的增加而增加,差異有顯著性(P<0.05)；A、B組BF厚度較C組均顯著變薄(P<0.05),以A組效果更明顯,且A組和B組

9、之間BF厚度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肺炎組經(jīng)氣囊導(dǎo)尿管機(jī)械清理后A、B組BF厚度均顯著變薄(P<0.05)趨勢同體外循環(huán)組。
　　 (4)體外循環(huán)組和肺炎組中A、B組VAP發(fā)生率與C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,三組患兒入住ICU時(shí)間、MV時(shí)間差異不顯著,但A、B組入住ICU時(shí)間、MV時(shí)間有減少的趨勢,A組更明顯。
　　 結(jié)論:氣囊導(dǎo)尿管機(jī)械清理法可有效的清除氣管導(dǎo)管內(nèi)分泌物、延緩和阻止ETT-BF的形成,降低VAP的發(fā)