1、目的：
　　 研究不同組份聚醚醚酮.羥基磷灰石.碳纖維復合材料的細胞毒性及對成骨細胞生物學行為的影響
　　 材料與方法
　　 1、獲得高純度鼠成骨細胞培養(yǎng)方法的研究:取出生時間小于24小時的SD大鼠5只,采用多次酶消化法進行體外細胞培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)；繪制成骨細胞生長曲線。經(jīng)堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定成骨細胞,分析成骨細胞純度和礦化能力。
　　 2、聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復合材料對

2、成骨細胞的毒性研究:根據(jù)IS010993-5標準制備材料的浸提液,將不同組份復合材料的浸提液與大鼠成骨細胞共同培養(yǎng),分別于培養(yǎng)第3、5、7天,應用CCK-8試劑盒測定成骨細胞的活性,計算相對增殖率,依據(jù)增殖率評價材料對細胞的毒性。
　　 3、聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復合材料對成骨細胞生物學行為影響的研究:在聚醚醚酮復合材料上接種大鼠成骨細胞并培養(yǎng)1-14天,測定細胞4小時的黏附情況；分別于第1、3、7天應用流式細胞儀測定細胞

3、周期,計算細胞增殖指數(shù)；應用熒光實時逆轉錄PCR測定復合成長第14天的成骨細胞的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)、骨鈣素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型膠原酶(Type Ⅰ collagen,COL-Ⅰ)的mRNA表達；應用掃描電鏡觀察復合生長的成骨細胞的形態(tài)和結構的變化。
　　 結果：
　　 1、原代提取的成骨細胞呈圓形懸浮在培養(yǎng)液中,2小時開始貼壁。培養(yǎng)3天后,細胞呈三角形、多角形

4、及不規(guī)則形,胞核偏向一側。絕大部分細胞(95％以上)堿性磷酸酶染色呈陽性,經(jīng)茜素紅染色呈紅色礦化結節(jié)。
　　 2、各種不同組分材料的聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復合材料的浸提液在不同時期的毒性分級均在0～1級之間,可見不同組份聚醚醚酮.羥基磷灰石.碳纖維復合材料的浸提液無細胞毒性作用。
　　 3、不同聚醚醚酮復合材料的黏附性無明顯統(tǒng)計學差異；成骨細胞在較高羥基磷灰石含量的聚醚醚酮復合材料的增殖指數(shù)高于其它組。ALP mR

5、NA、COL-ⅠmRNA的表達隨著PEEK-HA-CF復合材料中HA含量的增加而增多。BGP mRNA在各組中的表達無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。通過掃描電鏡觀察復合材料成骨細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn):培養(yǎng)14天時,羥基磷灰石含量高組(質(zhì)量分數(shù)為20％)表面成骨細胞周圍形成大量類骨樣結節(jié),明顯高于其他組,有利于骨形成。
　　 結論：
　　 1、利用階段酶消化法分離提取的成骨細胞具有典型的成骨細胞特性,獲得的成骨細胞純度高、增殖能力強,