1、研究背景：
　　乳腺癌是全世界女性發(fā)生的最常見惡性腫瘤之一，約占女性新發(fā)癌癥總數的1/4，其死亡率占女性癌癥的15％，位居女性惡性腫瘤死亡率之首，隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅著女性的生命和健康，對經濟、社會、家庭及女性的精神及心理方面造成了極大的影響。近年來，乳腺癌的預防工作受到人們越來越多的關注，研究工作者通過建立不同用途的乳腺癌動物模型，探討乳腺癌的病因及發(fā)生發(fā)展機制，將對乳腺癌的防治工

2、作具有重要價值。
　　研究表明乳腺癌的發(fā)生是一個連續(xù)的多步驟過程，即從正常組織、普通增生、不典型增生、原位癌至浸潤性癌的過程。學者們認為在癌前病變及其之前階段是可以逆轉的，因此，復制這一連續(xù)變化過程、明確其發(fā)生機制及組織病理學變化，將有助于人們尋找有效措施及時預防與控制乳腺癌的發(fā)生。鑒于乳腺是一個激素依賴性器官，雌激素的主要作用是促進乳腺導管生長及導管上皮細胞的增生，孕激素在此基礎上，促進了乳腺小葉和腺泡的充分發(fā)育。同時，7，12

3、二甲基苯葸(7，12-dimethylbenz-(a)anthracene，DMBA)作為一種動物實驗模型常用的致癌誘導劑，在適合激素水平條件下也可特異性地誘導動物乳腺癌的發(fā)生。目前，盡管成功建立了越來越多的乳腺癌實驗動物模型，并且為研究乳腺癌的發(fā)病機制及治療策略奠定了基礎，但是系統(tǒng)地觀察和全面分析這些模型的組織形態(tài)學變化的研究還較少。本研究通過DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague-Dawley，SD)大鼠乳腺癌的發(fā)生

4、，觀察大鼠乳腺的組織病理學變化，并通過標記人類的乳腺病變診斷相關分子P63、CK5/6、CK34β E12及乳腺癌發(fā)病機制相關蛋白與基因E-Cadherin、PCNA、Bcl-2等的表達，研究它們在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達差異性及相關性分析，探討乳腺癌的癌變過程，不但為以后乳腺癌動物模型的進一步研究奠定了組織病理學基礎，同時也為研究人類乳腺癌的發(fā)病機制及治療提供了理論依據。
　　第一部分、DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導大鼠乳腺癌發(fā)

5、生的組織形態(tài)學觀察
　　目的：通過DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導SD大鼠乳腺癌的發(fā)生，顯微鏡下觀察大鼠乳腺病變的組織病理學變化。
　　方法：
　　50只21日齡、雌性SD大鼠被隨機分為5組，分別為G0(Group0)、GⅠ(GroupⅠ)、GⅡ(GroupⅡ)、GⅢ(GroupⅢ)、GⅣ(GroupⅢ)。G0:空白對照組，GⅠ:DMBA15mg/kg，GⅡ:DMBA20mg/kg，GⅢ: DMBA25mg/kg，GⅣ:DMB

6、A30mg/kg，GⅠ-Ⅳ均分別給予雌二醇苯甲酸酯0.5mg/kg和孕酮4mg/kg，5天為一個周期。每組所得大鼠乳腺標本均進行10％中性福爾馬林固定、石蠟包埋、常規(guī)4μ m厚度切片及蘇木素-伊紅染色，在光學顯微鏡下觀察，并記錄實驗第120天、第148天及第180天的每只大鼠乳腺病變類型，包括了乳腺導管增生、小葉增生、間質增生、囊性增生、導管不典型增生、小葉非典型增生、原位癌及浸潤性癌，觀察標準均采用人類乳腺病變的WHO系統(tǒng)分類法。

7、r>　　結果：
　　1.大鼠乳腺病變的改變包括良性病變、癌前病變，原位癌和浸潤性癌，其中良性增生性病變又包括了導管增生，小葉和腺泡的增生，囊性增生，間質增生，而癌前病變主要是導管的不典型增生和小葉的不典型增生。
　　2.實驗組乳腺病變的發(fā)生率在實驗第120天，第148天，第180天分別為4.38％、14.06％、34.06％，呈遞增趨勢，并且第180天發(fā)生率最高，第180天實驗組乳腺導管增生、導管非典型增生、原位癌到浸潤性癌

8、的發(fā)生率分別為57.5％、45％、32.5％、22.5％，呈遞減趨勢。
　　結論：
　　DMBA聯(lián)合雌孕激素可以誘導大鼠乳腺癌發(fā)生，并且在實驗第120天，第148天，第180天可以觀察到大鼠乳腺從良性病變到癌前病變，最后變成癌的多步驟、連續(xù)的過程。
　　第二部分、研究P63、CK5/6和CK34βE12在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達差異性
　　目的：觀察SD大鼠和人類乳腺導管病變中P63、CK5/6和CK34β

9、E12的表達，探討它們的表達差異性，比較分析SD大鼠和人類乳腺癌發(fā)生的異同。
　　方法：
　　收集本研究的第一部分實驗SD大鼠乳腺及山東省醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院病理科2013-2014年人類乳腺癌手術切除的存檔石蠟標本各10例，每例大鼠和人類乳腺組織的病理結果均經病理醫(yī)師診斷為浸潤性導管癌，并且均可以觀察到導管普通型增生、不典型增生、導管原位癌及浸潤性導管癌等病變。采用免疫組織化學染色PV-9000二步法檢測P63、CK5/6和

10、CK34β E12的蛋白表達情況，在顯微鏡下觀察計數，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析:(1) P63、CK5/6和CK34β E12分別在大鼠和人類乳腺各組病變中的表達差異性;(2) P63、CK5/6和CK34βE12在大鼠乳腺各組病變與人類乳腺各組病變間的表達差異性。
　　結果：
　　1.P63蛋白表達陽性率在大鼠和人類乳腺導管病變之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);P63在大鼠和人類乳腺導管普通型增生、不典型增生、

11、原位癌、浸潤性癌中的表達陽性率逐漸減少，組間差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　2.大鼠和人類乳腺組織中，CK5/6、CK34βE12蛋白表達陽性率在導管普通型增生、不典型增生、原位癌、浸潤性癌中逐漸減少，組間差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01);而大鼠乳腺病變與人類乳腺病變中的表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　1.P63、CK5/6和CK34β E12蛋白在大鼠乳腺各組病變的表

12、達與人類乳腺相似，提示大鼠乳腺癌變過程與人類乳腺癌發(fā)生基本一致，包括了乳腺導管普通型增生、非典型增生、原位癌到浸潤性癌的多步驟的連續(xù)過程。
　　2.P63、CK5/6和CK34βE12作為臨床病理診斷常用的人類乳腺肌上皮分子標記，在研究大鼠乳腺病變中具有相同的診斷價值。
　　3.大鼠乳腺與人類乳腺有類似的組織形態(tài)學變化，為乳腺癌模型研究提供了組織病理學基礎，并且可能成為乳腺癌預防與治療策略研究的理想模型。
　　第三部分

13、、研究E-Cadherin、PCNA和Bcl-2在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達差異性及相關性分析
　　目的：觀察E-Cadherin、PCNA和Bcl-2蛋白在大鼠和人類乳腺導管普通型增生、不典型增生、原位癌、浸潤性癌及正常乳腺組織中的表達，探討它們在大鼠和人類乳腺病變中的表達差異性及相關性分析。
　　方法：
　　收集本研究第一部分實驗的SD大鼠乳腺導管病變石蠟標本和山東省醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院人類乳腺癌石蠟標本各10例

14、，標本篩選標準同本研究的第二部分實驗，采用免疫組織化學染色PV-9000二步法檢測E-Cadherin、PCNA和Bcl-2蛋白的表達水平，分別采用PCNA表達的陽性率標記細胞增殖指數(proliferationindex，PI)和Bcl-2表達的陽性率標記抗細胞凋亡指數(apoptosis index，AI)，觀察染色結果并計數陽性細胞數，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析:(1) E-Cadherin、PCNA和Bcl-2分別在大鼠和

15、人類乳腺各組病變中的表達差異性;(2) PCNA的表達與E-Cadherin的相關性分析;(3)細胞增殖指數與抗細胞凋亡指數相關性分析。
　　結果：
　　1.E-Cadherin蛋白表達水平在大鼠正常乳腺導管、導管普通型增生、不典型增生、原位癌及浸潤性癌中逐漸減少，組間差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01);E-Cadherin蛋白在人類乳腺病變組織的表達趨勢與大鼠一致，并且差異也有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

16、　　2.PCNA蛋白表達陽性率在大鼠乳腺正常導管、導管普通型增生、不典型增生、原位癌及浸潤性癌逐漸增加，組間差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，并且正常導管、導管普通型增生、不典型增生與原位癌之間，兩兩比較差異有顯著性(P＜0.01)，PCNA蛋白在人類乳腺各組病變的表達水平與大鼠中呈相同的趨勢，差異也有顯著性統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　3.Bcl-2蛋白表達水平在大鼠各組乳腺病變中呈遞增趨勢，組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜

17、0.01)，而在人類乳腺各組病變中的表達趨勢類似于大鼠，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4.大鼠和人類乳腺病變中，PCNA蛋白的表達強度分數與E-Cadherin的表達呈負相關(P＜0.05)，而PI與Bcl-2蛋白表達陽性率呈正相關(P＜0.05)。
　　結論：
　　1.乳腺病變由普通型增生、不典型增生、原位癌發(fā)展到浸潤性癌的過程中E-Cadherin表達逐漸減少，提示E-Cadherin蛋白失表達可能與乳腺

18、癌的發(fā)生有關。
　　2.PCNA、Bcl-2蛋白表達水平與細胞增殖和抗細胞凋亡指數隨著乳腺病變發(fā)展過程呈上升趨勢，并且細胞增殖指數與抗細胞凋亡指數呈正相關，推測細胞增殖和細胞抗凋亡的相互作用可能促使了乳腺癌的發(fā)生。
　　3.PCNA蛋白的表達強度分數與E-Cadherin的表達呈負相關，提示細胞增殖程度與細胞粘附性可能有關，參與乳腺細胞的癌變。
　　4.大鼠乳腺病變中E-Cadherin、PCNA和Bcl-2蛋白的表達