1、腸道抗氧化酶系統(tǒng)在氧化應激中起到重要作用。本研究首先探討了肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時空表達規(guī)律及與吸收能力的關系；其次建立了雞腸上皮細胞的原代培養(yǎng)技術，并利用H2O2建立了體外氧化應激模型。初步探討了Nrf2以及MAPK信號通路參與氧化損傷的調控機制。本研究為家禽腸道發(fā)育提供了理論支持，為腸道損傷機制的研究奠定了科學基礎。
　　試驗一肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時空表達規(guī)律。選取1日齡AA肉雞120只，隨機分成8組，每組15只。分別在1、

2、3、7、11、14、21及35日齡采集十二指腸、空腸、回腸、心臟、肝臟和腎臟進行抗氧化酶表達檢測。結果顯示，肉雞腸道抗氧化酶活性顯著低于心臟、肝臟和腎臟；腸道中CAT和GPx的活性隨日齡增長顯著下調，抗氧化酶系統(tǒng)相關基因mRNA表達水平顯著下調（P<0.05），腸道發(fā)育過程中Nrf2的mRNA表達量降低（P<0.05）；35d腸道CAT活性顯著高于腸粘膜，但mRNA表達水平較粘膜低（P<0.05）；免疫組化結果表明，腸道抗氧化酶主要存在

3、于粘膜層的腸絨毛上皮細胞內。以上結果表明腸道抗氧化酶隨日齡增加表達量降低，Nrf2可能對該過程起調控作用。
　　試驗二不同吸收效率肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)分析。利用D-木糖吸收測試篩選不同吸收效率的肉雞。比較不同吸收效率的肉雞血清抗氧化系統(tǒng)及腸道抗氧化酶、形態(tài)結構和養(yǎng)分轉運載體表達的差異。24日齡和28日齡對肉雞進行D-木糖吸收測試，篩選出的兩組肉雞血清內D-木糖含量均顯著差異（P<0.05）；高吸收組肉雞血清內T-SOD活性（P<0

4、.05）以及MDA含量（P=0.10）低于低吸收組肉雞；高吸收組肉雞回腸CAT活性明顯高于低吸收組（P<0.05）；高吸收組回腸絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度顯著高于低吸收組（P<0.05）；兩組肉雞腸道SGLT1、CAT1、CAT2和b0，+AT的表達存在差異（P<0.05）。以上結果表明D-木糖吸收試驗可以成功篩選出不同吸收效率的肉雞，其原因可能是腸道形態(tài)和養(yǎng)分載體表達不同，但吸收效率對腸道抗氧化酶系統(tǒng)無明顯影響。
　　試驗

5、三雞腸上皮細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。選取18胚齡的SPF雞胚，分離十二指腸，使用機械擠壓和?型膠原酶消化聯(lián)合獲取腸粘膜上皮細胞。48h貼壁生長后，顯微鏡下觀察可見鋪路石狀細胞；通過H.E和吉姆薩染色確定上皮細胞形態(tài)；電子顯微鏡顯示有微絨毛、緊密連接結構和橋粒等超微結構；檢測結果表明分離培養(yǎng)的上皮細胞能夠表達特異性蛋白：堿性磷酸酶、CK18及Claudin-1。以上結果表明腸上皮細胞原代培養(yǎng)方法建立成功。
　　試驗四氧化應激對腸上皮細

6、胞的影響。分別用5mmol/mL和10mmol/mL的H2O2刺激原代雞腸上皮細胞1h。結果顯示隨H2O2濃度升高，細胞抗氧化酶系統(tǒng)表達下降，氧化損傷加重；氧化應激導致腸上皮細胞ERK1/2、JNK和p38蛋白磷酸化水平上調（P<0.05）；腸上皮細胞Nrf2及其下游基因的mRNA表達水平顯著下調（P<0.05）。以上結果表明H2O2處理能夠造成腸上皮細胞急性氧化損傷，破壞抗氧化-氧化平衡，同時MAPK信號通路及Nrf2信號通路可能參與