1、本試驗(yàn)以體外培養(yǎng)雞胚腦神經(jīng)元為研究對(duì)象，在培養(yǎng)液中加入不同濃度CdCl2，通過對(duì)神經(jīng)元活性檢測(cè)、形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞凋亡、抗氧化功能、DNA損傷、△ψm、細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度、Caspase-3，9活性及細(xì)胞內(nèi)CaM、Caspase-3mRNA表達(dá)水平等的檢測(cè)，探討了鎘致雞胚腦神經(jīng)元凋亡的機(jī)理。研究結(jié)果表明： 1.選用7d齡雞胚分離腦神經(jīng)細(xì)胞，采用四唑鹽比色法(MTT法)和二硝基苯肼比色法觀察CdCl2對(duì)雞胚腦神經(jīng)元活性的影響，結(jié)果

2、表明CdCl2對(duì)雞胚腦神經(jīng)元具有毒性作用。 2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)磷脂酰絲氨酸(PS)，AO/EB雙熒光染色、HE染色、透射電鏡觀察鎘致雞胚腦神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化、瓊脂糖凝膠電泳、TUNEL法觀察不同濃度CdCl2誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元凋亡情況，從不同角度證實(shí)CdCl2能夠引發(fā)神經(jīng)元凋亡。 3.通過對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗氧化功能的檢測(cè)，結(jié)果表明鎘能夠?qū)е律窠?jīng)元NOS活性與NO含量升高，ROS含量增高，表明CdCl2能夠破壞機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)及

3、清除自由基功能，使雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化損傷，進(jìn)而誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。 4.應(yīng)用堿性SCGE檢測(cè)鎘對(duì)雞胚腦神經(jīng)元DNA的損傷作用，結(jié)果證實(shí)CdCl2通過引起神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度增加，激活內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶導(dǎo)致DNA在核小體間斷裂途徑誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡。 5.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)△ψm，比色法檢測(cè)Caspase-3，Caspase-9活性，熒光探針法檢測(cè)雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度，半定量RT-PCR法檢測(cè)了神經(jīng)元內(nèi)Caspase-

4、3mRNA、CaMmRNA表達(dá)水平。試驗(yàn)表明CdCl2導(dǎo)致雞胚腦神經(jīng)元游離鈣離子濃度升高，干擾細(xì)胞鈣離子的轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡，使△ψm下降，Caspase-3，9活性上升，進(jìn)而通過激活線粒體凋亡通路導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡。 本試驗(yàn)從細(xì)胞、分子水平上探討鎘致禽類腦神經(jīng)元性作用，揭示了鎘能夠降低神經(jīng)元的活性、誘發(fā)氧化應(yīng)激、損傷細(xì)胞DNA、干擾細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)、影響細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，闡明了鎘致禽類腦神經(jīng)元毒性機(jī)制，為畜禽鎘中毒的防