1、目的：探討非小細胞肺癌（NSCLC）中Egr-1對survivin啟動子轉錄活性的影響。
　　方法：（1）免疫組化SP法檢測93例NSCLC和40例良性肺疾病組織中Egr-1和Survivin的蛋白表達；（2）RT-PCR檢測A549細胞和人成纖維細胞中egr-1 mRNA及survivin mRNA的表達；（3）A549細胞分為二組：PMA處理組和PMA未處理組，提取全細胞蛋白，Western Blot檢測Egr-1和Survi

2、vin的蛋白表達；（4）PMA（10ng/ml）預處理A549細胞0h、12h、24h后，提取核蛋白通過EMSA檢測PMA誘導前后A549細胞核蛋白的表達情況，檢測經DIG標記的可能含有Egr-1位點的survivin啟動子部分序列與核蛋白的結合情況。
　　結果：（1）NSCLC組織中Survivin的陽性率為83.9％(78/93)，明顯高于良性肺疾病組織7.5%(3/40)(p<0.05)；Egr-1在NSCLC中的陽性率為6

3、.5%(6/93)，低于良性肺疾病組織95%(2/40)(p<0.05)；在癌旁組織中可見Survivin蛋白呈陰性表達而Egr-1蛋白呈陽性表達。Survivin與Egr-1蛋白在NSCLC組織中的表達呈負相關(rs'=-0.778 P<0.05)。（2）1.5%瓊脂糖凝膠電泳顯示，A549細胞組加入survivin PCR產物的泳道出現一條較亮的條帶，明顯高于GAPDH（光密度比值1.82），加入egr-1 PCR產物的泳道出現一條

4、很淡的條帶，明顯低于GAPDH（光密度比值0.42）；成纖維細胞組加入egr-1 PCR產物的泳道出現一條明顯高于GAPDH的條帶而加入survivin PCR產物的泳道出現條很淡的條帶（光密度比值0.03）。說明A549細胞中survivin mRNA表達明顯高于egr-1，成纖維細胞中survivin mRNA表達明顯低于egr-1（P<0.05）。（3）以β-Actin為內參，PMA未處理組：Survivin蛋白（光密度比值1.3

5、2）的表達高于Egr-1蛋白表達（光密度比值0.64），PMA處理組Egr-1蛋白表達（光密度比值1.52）明顯升高，Survivin蛋白（光密度比值0.81）表達略有下降（P<0.05）。（4）不加PMA誘導的泳道出現較淡的一條條帶（光密度148），加入PMA誘導12h的泳道出現一條明顯的條帶（光密度210），而加入PMA誘導24h的泳道條帶基本消失（光密度95），說明PMA處理A549細胞12h是能與DIG-survivn標記探針結

6、合的核蛋白表達的最佳誘導時間；survivin啟動子序列-192bp~-163bp與A549細胞核蛋白作用，自顯影后出現 DNA-核蛋白結合條帶；100倍過量的未標記探針、Egr-1和Sp1的一致序列（EGRcons、Sp1cons）均競爭了標記探針，無條帶出現，Egr-1和Sp1的突變序列（EGRmut、 Sp1mut）則無競爭作用，條帶依然存在。加入Egr-1抗體后，條帶滯后，加入Sp1抗體條帶未滯后，說明與survivin啟動子-