1、目的：應(yīng)用生物信息學(xué)對大腸癌相關(guān)抗原基因CRC-L-10的基因結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能進(jìn)行預(yù)測，RT-PCR鑒定CRC-L-10的表達(dá)譜；應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)方法鑒定、分析抗大腸癌單克隆抗體Hb3識別的相關(guān)抗原Ca-Hb3。 方法：應(yīng)用美國國家生物信息中心(NCBI)的核酸數(shù)據(jù)庫，EST數(shù)據(jù)庫和相應(yīng)軟件分析進(jìn)行生物信息學(xué)分析。提取細(xì)胞總RNA，采用半定量RT-PCR擴(kuò)增CRC-L-10，凝膠電泳后對電泳圖進(jìn)行灰度掃描。提取HR

2、T-18細(xì)胞總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE、Western blot鑒定出與Hb3特異結(jié)合的PAGE膠條帶，目的條帶胰酶消化后，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：大腸癌相關(guān)基因CRC-L-10定位于15q25.2，最長開放閱讀框?yàn)?79bp，編碼192個(gè)氨基酸，廣泛表達(dá)于許多正常組織如骨、肝、胰、心臟等，但在皮膚癌、腎癌、胃癌、肝癌等10種腫瘤組織中表達(dá)明顯上調(diào)，而在相應(yīng)正常組織中低表達(dá)。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CRC-L-10

3、在腫瘤細(xì)胞株的表達(dá)與正常細(xì)胞株比較，均無顯著性差異(P>O.05)。 大腸癌相關(guān)抗原Ca-Hb3經(jīng)質(zhì)譜鑒定為CKAP4相似蛋白，分子量62.02KD。該蛋白有1個(gè)疏水區(qū)、1個(gè)跨膜區(qū)、5個(gè)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)、4個(gè)糖基化位點(diǎn)和49個(gè)磷酸化位點(diǎn)，屬于a結(jié)構(gòu)類蛋白，與P63蛋白序列高度同源。而P63的亞型DeltaNp63 a被認(rèn)為是個(gè)潛在的致癌基因，表達(dá)特性與Ca-Hb3相似。 結(jié)論： 1．CRC-L-10經(jīng)生物信息學(xué)分析為