1、心血管疾病由于其發(fā)生率和死亡率較高，已成為當(dāng)今國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究中的熱點之一，而缺血性心肌損傷始終是心血管病人發(fā)病率和死亡率升高的主要原因。臨床上，急性冠脈綜合征和大部分急性心肌梗死的病人，有明確的缺血性心肌損傷的臨床表現(xiàn)，但冠脈造影并沒有發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的血管狹窄，可見經(jīng)典理論中以血管狹窄的嚴(yán)重程度作為冠心病發(fā)病的主要決定因素還不夠完善。最近已有一些研究認(rèn)為，冠脈微血管結(jié)構(gòu)和功能的失調(diào)在冠心病發(fā)病機制中具有一定的作用，從而心肌微循環(huán)的改變引起人們

2、的關(guān)注，盡管在冠脈微血管不產(chǎn)生類似于大的冠狀動脈內(nèi)膜增厚或斑塊形成等病理改變，但心肌微血管的功能性改變可能與冠心病的發(fā)病及進展之間存在一定的關(guān)系。 近年研究認(rèn)為，動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)也是一個炎癥性疾病，是單核/巨噬細(xì)胞、補體和T-淋巴細(xì)胞的活化作用誘導(dǎo)慢性炎癥進展的結(jié)果。補體系統(tǒng)是機體體液防御機制的一個組成部分，也是一個炎癥過程的初級調(diào)節(jié)介質(zhì)，近十年來已有較多的新證據(jù)表明，補體活化作用在AS損傷的

3、起始階段和進展階段均起著重要作用。補體系統(tǒng)通過經(jīng)典途經(jīng)、植物凝集素途經(jīng)或旁路途經(jīng)激活，其中旁路途經(jīng)是通過微生物表面和6個血漿糖蛋白之間的相互作用激活，備解素(Properdin，P因子)是旁路途經(jīng)的正性調(diào)節(jié)劑，它作為環(huán)聚合物(如二聚體、三聚體、四聚體等)循環(huán)在血清中，通過結(jié)合在C3和C5轉(zhuǎn)化酶復(fù)合物(C3bBb和C3bnBb)上而加強其穩(wěn)定性。盡管備解素在血漿中的濃度范圍達到4～6μg/ml，但其生理學(xué)來源還不清楚。單核細(xì)胞、T-淋巴細(xì)

4、胞和骨髓源性細(xì)胞系(如HL-60，U-937，MonoMac6等)可以合成備解素，但不可能產(chǎn)生顯著的血漿水平，這是因為單核細(xì)胞產(chǎn)生備解素有賴于血液中有限的數(shù)量，而中性粒細(xì)胞(PMN)由于釋放備解素后會發(fā)生細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象，故推測備解素的生成更趨向于在血管、而非單獨在血液循環(huán)中。血管內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelialcell，EC)可表達大量補體系統(tǒng)相關(guān)蛋白，然而研究發(fā)現(xiàn)，雖然備解素屬于補體成分，但維持在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下的EC中不能檢測到備解素

5、。最近，已有報道剪切力作用下的EC具有合成備解素的能力，而備解素與心肌微血管改變之間的關(guān)系國內(nèi)外尚無報道，了解備解素的表達與心肌微血管病變之間的關(guān)系，可能對于進一步探究補體的激活和補體成分備解素在冠心病的發(fā)病和進展中的作用、以及對冠心病的發(fā)病機制和防治都有較重要的意義。 高血脂是冠心病獨立的危險因素之一，而高血脂大鼠是研究冠心病的一個成熟的動物模型。本實驗擬在建立高血脂大鼠模型的基礎(chǔ)上研究冠狀動脈粥樣硬化進程中，心肌微血管系統(tǒng)結(jié)

6、構(gòu)和功能的改變以及備解素的分泌、作用部位和調(diào)節(jié)機制，以進一步了解冠心病的發(fā)病機制，為冠心病的防治提供一條新途經(jīng)。本研究內(nèi)容包括三個部分：(1)高血脂致心肌缺血性損傷大鼠模型的建立；(2)高血脂對SD大鼠血液單個核細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)備解素的影響；(3)剪切力作用下SD大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞備解素的表達。主要結(jié)果如下： 1.根據(jù)我們的實驗觀測，隨高脂飼喂時間的延長，本實驗建立的高血脂大鼠模型以血清Tch、LDLC、APO-B升高，HDLC

7、逐漸降低為主，高脂飼喂后期(50天后)出現(xiàn)cTnI升高，并與Tch、LDLC呈正相關(guān)，表明高血脂可以誘導(dǎo)心肌損傷的發(fā)生；高血脂大鼠血漿粘度也隨之逐漸升高，紅細(xì)胞變形性逐漸降低，說明本模型的主要病理改變不在血栓形成方向，所造成的血液高粘滯綜合征屬于輕度，相關(guān)分析結(jié)果表明，血漿粘度和紅細(xì)胞變形性的改變與血脂升高密切相關(guān)。 2.隨著高脂飼喂時間的延長，高血脂大鼠SAP、DAP、LVSP、LVEDP、±dp/dtmax呈下降趨勢，并與血

8、液Ich、APOB升高密切相關(guān)，提示高血脂可以影響心肌左室舒縮功能，且其左室舒縮功能的下降與血液Tch、APOB升高密切相關(guān)。 3.隨著高脂飼喂時間的延長，雖然心肌微血管密度有代償性逐漸增加的趨勢，但是微動脈厚度也在逐漸增厚，提示在高膽固醇血癥期，心肌微血管出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能的病理性改變，即可出現(xiàn)心肌缺血性損傷。 4.實驗結(jié)果表明，高血脂可以影響脾臟中單核/淋巴細(xì)胞的凋亡；高膽固醇可以活化外周血單核/淋巴細(xì)胞，刺激其細(xì)胞內(nèi)備

9、解素合成增多，提示高膽固醇不僅影響自身抗原反應(yīng)性的單核/淋巴細(xì)胞的清除，而且能進一步活化外周血單核/淋巴細(xì)胞，刺激其細(xì)胞內(nèi)補體旁路途徑激活的正性調(diào)節(jié)因子-備解素合成的增多，以擴大補體級聯(lián)反應(yīng)，可能參與和促進組織和細(xì)胞的免疫損傷。 5.本實驗結(jié)果表明，低層流剪切力可以誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞合成備解素，并提示高血脂也可能誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞合成備解素。 6.本實驗采用蛋白酶消化及機械剪切、過濾的方法培養(yǎng)大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)

10、胞，其純度和獲得率較高；應(yīng)用鼠尾膠原預(yù)處理培養(yǎng)皿，可獲得與以Laminin處理培養(yǎng)皿一樣的培養(yǎng)效果；實驗結(jié)果表明CD31是一個有效的微血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記物?？傊?，通過本課題的研究，不僅對高脂血癥血液流變特性和血流動力學(xué)特性方面進行了系統(tǒng)的探討，而且對冠心病的發(fā)病機制中心肌微血管系統(tǒng)的改變進行了較詳細(xì)的研究，亦證明補體參與了心肌微血管的炎性改變；本實驗還對心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分泌功能與流體力學(xué)之間的關(guān)系進行了初步的研究，并進一步對冠