1、目的：研究慢病毒介導的骨橋蛋白RNA干擾對人U251膠質(zhì)瘤細胞在裸鼠體內(nèi)生長的影響并探討其對膠質(zhì)瘤生長、侵襲的可能機制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供新的靶點。
　　 方法：應用RNA干擾技術(shù)，將已成功構(gòu)建的針對人OPN基因的慢病毒干擾載體LV-OPNshRNA及對照組空載體LV-N-OPN分別感染U251細胞。將未感染組U251細胞、空載體感染組U251細胞(LV-N-OPN/U251)、LV-OPNshRNA慢病毒感染組U251細胞

2、(LV-OPNshRNA/U251)分別接種于裸鼠皮下，建立裸鼠荷瘤模型。每天觀察裸鼠活動情況及皮下移植瘤的生長，每3天測量皮下腫瘤大小。三周后斷頸處死裸鼠，測量腫瘤的體積、瘤重。蘇木素-伊紅染色觀察腫瘤組織病理形態(tài)學變化；半定量RT-PCR法和Western blot法分別檢測OPN及相關(guān)分子uPA、MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表達變化；免疫組化法檢測腫瘤組織微血管密度(MVD)和血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達情況。<

3、br>　　 結(jié)果：1.與未感染組、空載體感染組相比，LV-OPNshRNA/U251感染組裸鼠皮下腫瘤生長緩慢，腫瘤體積及重量均明顯減小，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.蘇木素-伊紅染色結(jié)果顯示，未感染組、空載體感染組腫瘤細胞異型性明顯，侵襲能力強。
　　 3.半定量RT-PCR及Western blot結(jié)果表明，LV-OPNshRNA/U251感染組與其它兩組相比，OPN的mRNA和蛋白表達均明顯下降，

4、同時uPA、MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表達也明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.免疫組化實驗顯示，與其它兩組相比，LV-OPNshRNA/U251感染組的MVD值和VEGF的表達水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：應用慢病毒載體介導的RNA干擾技術(shù)，特異性地沉默U251細胞中OPN基因的表達，能夠明顯抑制人U251膠質(zhì)瘤細胞在裸鼠體內(nèi)的生長和侵襲。半定量RT-P